活性炭-超滤深度处理工艺中细菌群落时空分布及动态变化规律

蔡广强, 张金松, 刘彤宙, 尤作亮, 周常. 活性炭-超滤深度处理工艺中细菌群落时空分布及动态变化规律[J]. 环境工程学报, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166
引用本文: 蔡广强, 张金松, 刘彤宙, 尤作亮, 周常. 活性炭-超滤深度处理工艺中细菌群落时空分布及动态变化规律[J]. 环境工程学报, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166
CAI Guangqiang, ZHANG Jinsong, LIU Tongzhou, YOU Zuoliang, ZHOU Chang. Spatiotemporal distribution and dynamic variation of bacterial communities in granular activated carbon-ultrafiltration advanced treatment process[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166
Citation: CAI Guangqiang, ZHANG Jinsong, LIU Tongzhou, YOU Zuoliang, ZHOU Chang. Spatiotemporal distribution and dynamic variation of bacterial communities in granular activated carbon-ultrafiltration advanced treatment process[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166

活性炭-超滤深度处理工艺中细菌群落时空分布及动态变化规律

    作者简介: 蔡广强(1989—),男,博士研究生,工程师。研究方向:饮用水安全保障。E-mail:guangqiangcai@163.com
    通讯作者: 刘彤宙(1977—),男,博士,副教授。研究方向:水处理技术。E-mail:liutongzhou@hit.edu.cn
  • 基金项目:
    国家水体污染控制与治理科技重大专项(2015ZX07406-004);深圳市国家和省计划配套项目(GJHS20170314150756225);深圳市水务(集团)有限公司内部课题(2016YT12)
  • 中图分类号: TU991.2

Spatiotemporal distribution and dynamic variation of bacterial communities in granular activated carbon-ultrafiltration advanced treatment process

    Corresponding author: LIU Tongzhou, liutongzhou@hit.edu.cn
  • 摘要: 利用NovaSeq6000高通量测序技术对夏季和冬季我国南方某采用活性炭-超滤深度处理工艺自来水厂工艺过程中的细菌群落进行解析,以探究该工艺过程中细菌群落的分布和变化规律。结果表明,出厂水浊度、菌落总数等水质指标均符合国标GB 5749-2006的要求。混凝沉淀、超滤和消毒对细菌群落多样性起到去除作用,且夏季去除率明显高于冬季;夏季和冬季优势菌门均为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)等,但在属水平上细菌群落组成存在明显差异。此外,检测到的条件致病菌属主要包括分支杆菌属(Mycobacterium)和假单胞菌属(Pseudomonas),其在核心微生物中合计占比为5.56%。活性炭-超滤深度处理工艺过程中细菌群落具有明显的时空变化规律。
  • 石墨相氮化碳(g-C3N4)是一种类石墨烯层状二维结构的聚合物半导体,其内部七嗪环结构单元使其具有较高的化学和热稳定性,较低的带隙能量使其可有效吸收可见光[1-2],这些特性使g-C3N4成为具有较好应用前景的光催化材料。但在实际研究中发现,g-C3N4存在光生电子与空穴易于复合、比表面积小等不足[3],这在一定程度上限制了其光催化活性。研究人员通过将其与其他半导体材料复合[4]、助催化剂修饰[5]、染料敏化[6]、形貌结构优化[7]等方法,提高g-C3N4的可见光吸收能力和载流子迁移与分离效率,从而加强其催化效果。

    利用碳量子点(CQDs)负载修饰半导体光催化剂,可以提高光的利用率和催化效率[8-9]。CQDs本身具有良好的导电性,既可以作为电子供体也可以作为电子受体[10],有利于光生电子的快速迁移。此外,由于CQDs光化学稳定性高,具有上转换性等特有光学性质[11]。HU等[12]制备了CQDs/BiOCOOH/uCN光催化剂,构建Z型电荷转移机制,引入CQDs作为电子穿梭桥,从而提高了磺胺噻唑降解率。因此,将CQDs引入g-C3N4,二者之间以π-π键相连[13],形成异质结结构,可有效抑制载流子空穴复合效率,从而增强材料的光催化活性。

    本研究基于g-C3N4与CQDs的结构和性能特点,采用水热法制备了CQDs与g-C3N4质量比为10%的CQDs/g-C3N4复合光催化材料,且将其用于盐酸四环素的光催化降解,通过FESEM、FETEM、XRD、XPS以及UV-vis等方法表征了催化剂形貌和结构变化,并考察了该催化剂在可见光下对盐酸四环素的降解效果,进一步探究了CQDs/g-C3N4复合材料的光催化机制。

    所用试剂:三聚氰胺(C3H6N6)、柠檬酸(C6H8O7)、尿素(CH4N2O)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF,C3H7NO)、盐酸四环素(C22H25ClN2O8)、无水乙醇(C2H5OH)、氨水(NH3·H2O)和盐酸(HCl)均为分析纯;所有实验用水均为超纯水。

    所用仪器包括:XL-30 ESEM FEG型场发射扫描电子显微镜(美国FEI有限公司);Tecnai G2 20型场发射透射电子显微镜(美国FEI有限公司);BRUCKR D8 ADVANCE型X射线粉末衍射仪(德国布鲁克公司);ESC ALAB 250型X射线光电子能谱仪(美国Thermo公司);UV3600型紫外-可见近红外分光光度计(日本岛津公司);CHI1660C型电化学工作站(上海辰华仪器有限公司)。

    在槽型坩埚中放入适量三聚氰胺粉末,并将其置于管式炉内,以350 mL·min−1的速率向管内通5 min氮气排净空气。随后,设置管式炉升温速率为5 ℃·min−1,升温至600 ℃,煅烧6 h后得到g-C3N4样品,随炉自然冷却至室温,取出后研磨成粉末。将制备的g-C3N4样品与适量的无水乙醇混合均匀,放入超声波仪器中,将剥离后的样品放在60 ℃条件下烘干备用。

    称取1 g制备的g-C3N4样品,溶于10 mL DMF中,同时称取适量柠檬酸和尿素调整CQDs与g-C3N4的质量百分比为10%,将其加入上述溶液,搅拌至其完全溶解。将混合溶液转移至50 mL聚四氟乙烯反应釜中,在160 ℃下恒温反应4 h后自然冷却至室温。冷却后取出样品离心15 min,用无水乙醇反复洗涤3次,60 ℃条件下烘干得到10%CQDs/g-C3N4样品。

    选用300 W氙灯(400~800 nm)作为可见光光源。配制10 mg·L−1盐酸四环素水溶液,溶液pH用HCl和NaOH水溶液进行调节。称取g-C3N4和CQDs/g-C3N4催化剂分散于250 mL盐酸四环素水溶液中,在避光状态下以700 r·min−1搅拌10 min进行吸附。随后打开氙灯光源,每隔10 min取样2.5 mL,将所取样品用0.45 μm针式过滤器过滤,最后用紫外-可见分光光度计测定所得滤液吸光度值,计算盐酸四环素的降解率。

    图1可以看出,g-C3N4样品在2θ为12.94°和27.59°处出现的特征衍射峰,分别对应g-C3N4的(100)和(002)晶面[14]。这说明样品为纯相g-C3N4。其中(100)晶面与g-C3N4面内三嗪基基团相对应,(002)晶面与芳香环层间堆积相对应[15]。负载CQDs的复合材料中同样出现了对应的特征衍射峰,无其他明显杂峰。复合材料中由于CQDs的引入,衍射峰半峰宽增加且发生红移,晶粒尺寸减小,衍射峰强度减弱。这说明样品结晶度降低,但变化幅度并不明显。由此可以看出,碳量子点的负载对氮化碳本身的结构影响不大。

    图 1  纯g-C3N4以及10%CQDs/g-C3N4样品XRD图谱
    Figure 1.  XRD patterns of pure g-C3N4 and 10%CQDs/g-C3N4

    图2可以看出,g-C3N4基材料呈现出类石墨层状堆叠,具有不规则分布无定型团聚特征。与纯g-C3N4相比,负载CQDs的样品形貌未发生明显改变,CQDs的引入使得材料表面更加粗糙,团聚颗粒粒径变小。图2(c)和图2(d)分别为g-C3N4和10%CQDs/g-C3N4的EDS的表征结果。纯g-C3N4和10%CQDs/g-C3N4材料中都只含有C、N 2种元素,说明制备的样品具有较高的纯度。

    图 2  g-C3N4和10%CQDs/g-C3N4的FESEM和EDS图谱
    Figure 2.  FESEM and EDS images of g-C3N4 and 10%CQDs/g-C3N4

    为进一步探究材料形貌变化,对纯g-C3N4和10%CQDs/g-C3N4样品进行了FETEM表征。在图3(a)中可以清晰地观察到g-C3N4样品的层状结构。这进一步证明g-C3N4为二维薄纳米片,表面相对光滑。由图3(b)可以看到,10%CQDs/g-C3N4表面可以明显观察到量子点分布。这说明量子点的成功负载。与纯g-C3N4相比,CQDs的负载并未明显改变材料形貌。由图3(c)可以看到,10%CQDs/g-C3N4样品表面量子点粒径为4~5 nm。

    图 3  FETEM图谱g-C3N4、10%CQDs/g-C3N4、CQDs
    Figure 3.  FETEM images of g-C3N4, 10%CQDs/g-C3N4, CQDs

    为确定样品表面各元素化学状态变化情况,对纯g-C3N4与10%CQDs/g-C3N4样品进行了XPS分析。由图4(a)可见,纯g-C3N4与10%CQDs/g-C3N4样品图谱中含有明显的C1s和N1s的信号峰。这说明样品由C、N元素组成。由图4(b)可以看出,10%CQDs/g-C3N4在284.61 eV和288.42 eV处的信号峰分别对应N—C=N和C=C键作用。与纯g-C3N4相比,在286.22 eV处出现的信号峰对应CQDs中的sp2杂化碳,说明CQDs已成功被负载[16-17]。由图4(c)可见,在398.40、399.5和400.55 eV处的信号峰分别对应C=N—C、N—(C)3和C—N—H键[18]。负载CQDs后,C=N—C键峰面积增加,说明CQDs与g-C3N4二者之间存在化学相互作用[19],导致碳氮共轭π键强度增加。

    图 4  纯g-C3N4与10%CQDs/g-C3N4样品的XPS图谱
    Figure 4.  XPS spectra of pure g-C3N4 and 10%CQDs/g-C3N4 samples

    采用紫外-可见漫反射光谱图进一步探究了CQDs的引入对催化材料的光学性质的影响。由图5(a)中可以看出,与纯g-C3N4材料相比,10%CQDs/g-C3N4在可见光波长范围内表现出了较强的光吸收特性,复合材料的吸收带边向可见光区发生了红移。这说明碳量子点的引入增强了材料的可见光吸收响应[20]。根据Kubelka-Munk公式,作如图5(b)所示切线图,得到g-C3N4和10%CQDs/g-C3N4的禁带宽度分别为2.55 eV和2.36 eV。由此可见,CQDs的掺杂使材料的禁带宽度变低,有利于光催化反应中电子的迁移和分离,提高了材料光催化活性。

    图 5  纯g-C3N4与10%CQDs/g-C3N4样品的UV-vis图谱
    Figure 5.  UV-vis spectra of pure g-C3N4 and 10%CQDs/g-C3N4 samples

    电化学阻抗谱中高频区半圆直径的大小可表征电子迁移和分离效率,直径越小,催化材料中电荷转移阻抗越小[21]。由图6(a)可见,与纯g-C3N4相比,10%CQDs/g-C3N4具有较小的半圆直径。这说明CQDs的负载增强了材料迁移和分离载流子的效率,光生电子更容易发生跃迁,进而可提高材料催化活性;同时也进一步说明CQDs与g-C3N4之间存在化学键使电子可以在两相间实现转移。图6(b)反映了纯g-C3N4和10%CQDs/g-C3N4的光响应电流。二者均具有快速的光电流响应,10%CQDs/g-C3N4的响应值明显高于纯g-C3N4,这说明10%CQDs/g-C3N4对载流子的分离效率更高[22],更有利于光催化反应中载流子的参与。

    图 6  g-C3N4与10%CQDs/g-C3N4样品的电化学阻抗图谱和光响应电流图
    Figure 6.  EIS spectrum and transient photocurrent responses of g-C3N4 and 10%CQDs/g-C3N4 samples

    图7(a)为300W氙灯照射下0.3 g纯g-C3N4和10%CQDs/g-C3N4对10 mg·L−1盐酸四环素的降解效率。在可见光照射下,纯g-C3N4对盐酸四环素具有一定的降解效果,光照110 min时降解率达到45.46%;而CQDs/g-C3N4复合材料对盐酸四环素的降解效果明显高于纯g-C3N4,光照110 min时对盐酸四环素的降解率为99%。以上结果说明CQDs的引入提高了复合材料的光催化活性。

    图 7  盐酸四环素降解曲线和10%CQDs/g-C3N4样品Zeta电位图
    Figure 7.  Degradation curve of tetracycline hydrochloride and Zeta potentials of 10%CQDs/g-C3N4

    在室温条件下,探究了10%CQDs/g-C3N4的投加量对降解10 mg·L−1盐酸四环素的影响。如图7(b)所示,投加0.1、0.2、0.3和0.4 g的催化剂在避光状态下对盐酸四环素的去除率分别为31.2%、34.2%、43.2%和45.8%。当催化剂投加量为0.1 g时,10%CQDs/g-C3N4在光照110 min后对盐酸四环素的去除率为82%;当增加10%CQDs/g-C3N4投加量时,去除率也明显提升,这是因为催化剂的增加为光催化反应提供了更多的活性点位。催化剂投加量为0.3 g时,去除率提升到99%;当投加量继续增加至0.4 g时,去除率降解率接近100%。考虑到经济因素,选取0.3 g 作为10%CQDs/g-C3N4光催化剂的最佳投放量。

    反应体系的pH可在一定程度上影响目标污染物和催化剂表面的带电情况、二者之间的相互作用关系以及活性物质的形成。本研究在pH为4~9时,考察了pH对0.3 g 10%CQDs/g-C3N4光催化降解盐酸四环素的影响。随着pH的升高,10%CQDs/g-C3N4对盐酸四环素的去除率逐渐增大,在pH为7时达到最大,随后随着pH的升高而降低。因此,本研究中最佳pH为7。

    图7(d)所示,测得10%CQDs/g-C3N4复合材料在不同pH条件下的Zeta电位,得到材料等电点为5.4。当溶液中pH低于催化材料的等电点时,催化剂材料表面带正电荷,反之则带负电荷。四环素的pKa1=3.3、pKa2=7.7、pKa3=9.7,当3.3<pH<7.7时,溶液中的四环素以两性离子形态存在[23]。因此,当催化剂与四环素带异种电荷时,二者之间相互吸引,可提高对污染物的去除效率[24],在pH=7时四环素去除率达到最大;另一方面,在酸性条件下,H+浓度的增大,会抑制·OH的形成,从而不利于光催化反应的进行。

    催化剂材料的稳定性和可重复利用性是影响其实际应用的一项重要因素,因此,对10%CQDs/g-C3N4材料进行了循环实验,共重复光催化降解盐酸四环素实验5次。每次实验后回收催化剂用超纯水反复冲洗,并在60 ℃条件下烘干供下一次循环实验使用。由图8可以看出,10%CQDs/g-C3N4在5次循环光催化实验中对盐酸四环素均表现出良好的降解性能,降解率由99%下降至97%,且这一过程中催化剂基本无损耗。因此,10%CQDs/g-C3N4具备良好的稳定性和可重复利用性。

    图 8  10%CQDs/g-C3N4样品循环利用性能
    Figure 8.  Recycling of 10%CQDs/g-C3N4 samples

    在光催化降解有机物的反应过程中,催化剂表面产生具有氧化性的自由基活性物质,如空穴(h+)、羟基自由基(·OH)以及超氧自由基(·O2),与污染物发生反应将其氧化[25]。为探究10%CQDs/g-C3N4复合材料光催化降解盐酸四环素反应中起主要作用的活性物质,在实验过程中分别加入250 mmol·L−1草酸铵、叔丁醇和对苯醌作为抑制剂,观察对降解盐酸四环素的影响。如图9(a)所示,对苯醌的加入对盐酸四环素的降解并未产生明显影响,光照110 min后最终去除率为91%,草酸铵的加入使得去除率下降到70%,而叔丁醇对于光催化降解的抑制作用十分显著,最终去除率仅为50%。由此可以推断,·OH在10%CQDs/g-C3N4光催化降解盐酸四环素反应中为主要活性物质。

    图 9  10%CQDs/g-C3N4样品不同抑制剂条件下的降解曲线和ESR光谱
    Figure 9.  Degradation curve with different inhibitors and ESR spectra of 10%CQDs/g-C3N4 samples

    为了进一步探究10%CQDs/g-C3N4复合材料光催化反应机理,进行了电子自旋共振(ESR)测试。如图9(b)所示,黑暗状态下没有检测到ESR信号;光照条件下可看到明显的DMPO-·OH和DMPO-·O2信号。其中DMPO-·OH特征信号峰相对强度为1∶2∶2∶1,DMPO-·O2特征信号峰相对强度为1∶1∶1∶1。这说明在光照条件下反应体系中同时产生了·OH和·O2。根据上述活性物种捕获实验和ESR分析的结果,推断·OH在10%CQDs/g-C3N4的光催化反应中起主要作用[26]。此外,·OH的产生与h+密切相关。因此,可以认为CQDs/g-C3N4材料光催化反应由·OH与h+主导。

    图10为CQDs/g-C3N4复合材料光催化降解机理示意图。可见,在可见光照射下,当入射光能量大于催化剂材料的禁带宽度时,光生电子(e)被激发,从价带(VB)跃迁至导带(CB),同时价带上产生具有强氧化性的光生空穴(h+)。碳量子点能够捕获电子,有效抑制光生载流子与空穴的复合[27],此外,碳量子点的引入可以在两相间形成共轭π键,增强电子迁移能力。CQDs上的e与材料表面的吸附氧发生还原反应生成·O2,·O2将H2O氧化生成·OH[28];另一方面,光生空穴与H2O、OH发生氧化反应生成·OH,·OH具有强氧化性,能够将盐酸四环素氧化降解。

    图 10  CQDs/g-C3N4复合材料光降解机理示意图
    Figure 10.  Photodegradation mechanism of CQDs/g-C3N4 composite materials

    1)与纯g-C3N4相比,CQDs/g-C3N4可见光吸收范围更宽,光催化效率明显提高,光照110 min后10%CQDs/g-C3N4对盐酸四环素的去除率达到99%。

    2) 10%CQDs/g-C3N4光催化剂最佳投放量为0.3 g,最适pH为7。在此条件下其稳定性和可重复利用性均较好。

    3) CQDs/g-C3N4参与的光催化反应是由·OH和h+主导的,CQDs的引入提高了载流子迁移和分离效率,从而提高了材料的光催化活性。

  • 图 1  GAC-UF深度处理工艺流程图

    Figure 1.  Schematic diagram of GAC-UF advanced treatment process

    图 2  各样品在门水平上细菌群落组成

    Figure 2.  Bacterial community composition of each sample at phylum level

    图 3  各样品在属水平细菌群落组成

    Figure 3.  Bacterial community composition of each sample at genus level

    图 4  细菌群落变化主成分分析

    Figure 4.  Principal component analysis of bacterial community change

    图 5  水样间基于OTUs的花瓣图

    Figure 5.  Flower diagram based on OTUs among water samples

    表 1  GAC-UF深度处理工艺过程中水质参数变化

    Table 1.  Variations of water characteristics in GAC-UF advanced treatment process

    样品名称pH水温/℃浊度/NTU溶解氧/(mg·L−1)总磷/(mg·L−1)氨氮/(mg·L−1)UV254/cm−1TOC/(mg·L−1)CODMn/(mg·L−1)BDOC/(mg·L−1)菌落总数/(CFU·mL−1)HPC/(CFU·mL−1)
    S.RW7.8728.211.307.960.2060.1230.034 74.683.060.75260620
    S.CSE8.8428.31.628.241.49000.038 32.952.850.6511298
    S.GACFE7.8428.20.617.780.53200.025 42.402.480.452164
    S.UFE7.8228.40.118.650.10700.023 61.251.790.2330
    S.FW7.8828.30.108.620.10000.023 01.281.700.1912
    W.RW7.3117.22.949.290.1240.2100.028 62.782.500.521508800
    W.CSE8.1917.30.639.580.10500.019 02.682.300.43685700
    W.GACFE7.3017.20.399.050.12200.015 02.161.800.32421850
    W.UFE7.6017.40.049.920.13700.011 11.761.300.150370
    W.FW7.6517.30.079.930.09700.010 91.651.100.130323
    样品名称pH水温/℃浊度/NTU溶解氧/(mg·L−1)总磷/(mg·L−1)氨氮/(mg·L−1)UV254/cm−1TOC/(mg·L−1)CODMn/(mg·L−1)BDOC/(mg·L−1)菌落总数/(CFU·mL−1)HPC/(CFU·mL−1)
    S.RW7.8728.211.307.960.2060.1230.034 74.683.060.75260620
    S.CSE8.8428.31.628.241.49000.038 32.952.850.6511298
    S.GACFE7.8428.20.617.780.53200.025 42.402.480.452164
    S.UFE7.8228.40.118.650.10700.023 61.251.790.2330
    S.FW7.8828.30.108.620.10000.023 01.281.700.1912
    W.RW7.3117.22.949.290.1240.2100.028 62.782.500.521508800
    W.CSE8.1917.30.639.580.10500.019 02.682.300.43685700
    W.GACFE7.3017.20.399.050.12200.015 02.161.800.32421850
    W.UFE7.6017.40.049.920.13700.011 11.761.300.150370
    W.FW7.6517.30.079.930.09700.010 91.651.100.130323
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    表 2  各样品OTUs数目和α多样性指数

    Table 2.  OTUs numbers and alpha diversity indexes of each sample

    样品名称OTUsα多样性指数
    ShannonSimpsonChao1ACEGood’s coverage
    S.RW1 6957.3190.9841 876.5061 956.0420.985
    S.CSE1 4113.0950.5881 506.9751 550.8960.991
    S.GACFE2 4358.2190.9902 370.5002 409.8060.988
    S.UFE1 6765.9400.9581 689.8521 721.6050.988
    S.FW8814.4150.718866.174875.6340.995
    S.GACB1 8966.4680.9281 858.2971 898.8540.993
    W.RW2 0607.3880.9841 916.5762 035.4720.985
    W.CSE1 5376.2890.9741 589.2561 651.1410.986
    W.GACFE2 4908.8340.9912 497.8892 517.3660.982
    W.UFE1 3307.2970.9761 382.9411 548.9650.990
    W.FW1 1835.8310.9411 225.5671 311.8260.987
    W.GACB2 2788.5110.9812 131.8752 227.6220.984
      注:Shannon和Simpson为菌群多样性指数,Chao1和ACE为菌群丰度指数。
    样品名称OTUsα多样性指数
    ShannonSimpsonChao1ACEGood’s coverage
    S.RW1 6957.3190.9841 876.5061 956.0420.985
    S.CSE1 4113.0950.5881 506.9751 550.8960.991
    S.GACFE2 4358.2190.9902 370.5002 409.8060.988
    S.UFE1 6765.9400.9581 689.8521 721.6050.988
    S.FW8814.4150.718866.174875.6340.995
    S.GACB1 8966.4680.9281 858.2971 898.8540.993
    W.RW2 0607.3880.9841 916.5762 035.4720.985
    W.CSE1 5376.2890.9741 589.2561 651.1410.986
    W.GACFE2 4908.8340.9912 497.8892 517.3660.982
    W.UFE1 3307.2970.9761 382.9411 548.9650.990
    W.FW1 1835.8310.9411 225.5671 311.8260.987
    W.GACB2 2788.5110.9812 131.8752 227.6220.984
      注:Shannon和Simpson为菌群多样性指数,Chao1和ACE为菌群丰度指数。
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-08-17
  • 录用日期:  2020-10-23
  • 刊出日期:  2021-04-10
蔡广强, 张金松, 刘彤宙, 尤作亮, 周常. 活性炭-超滤深度处理工艺中细菌群落时空分布及动态变化规律[J]. 环境工程学报, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166
引用本文: 蔡广强, 张金松, 刘彤宙, 尤作亮, 周常. 活性炭-超滤深度处理工艺中细菌群落时空分布及动态变化规律[J]. 环境工程学报, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166
CAI Guangqiang, ZHANG Jinsong, LIU Tongzhou, YOU Zuoliang, ZHOU Chang. Spatiotemporal distribution and dynamic variation of bacterial communities in granular activated carbon-ultrafiltration advanced treatment process[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166
Citation: CAI Guangqiang, ZHANG Jinsong, LIU Tongzhou, YOU Zuoliang, ZHOU Chang. Spatiotemporal distribution and dynamic variation of bacterial communities in granular activated carbon-ultrafiltration advanced treatment process[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2021, 15(4): 1465-1472. doi: 10.12030/j.cjee.202008166

活性炭-超滤深度处理工艺中细菌群落时空分布及动态变化规律

    通讯作者: 刘彤宙(1977—),男,博士,副教授。研究方向:水处理技术。E-mail:liutongzhou@hit.edu.cn
    作者简介: 蔡广强(1989—),男,博士研究生,工程师。研究方向:饮用水安全保障。E-mail:guangqiangcai@163.com
  • 1. 哈尔滨工业大学(深圳)土木与环境工程学院,深圳 518055
  • 2. 深圳市水资源利用与环境污染控制重点实验室,深圳 518055
  • 3. 深圳市水务(集团)有限公司,深圳 518031
  • 4. 广州大学土木工程学院,深圳 510006
基金项目:
国家水体污染控制与治理科技重大专项(2015ZX07406-004);深圳市国家和省计划配套项目(GJHS20170314150756225);深圳市水务(集团)有限公司内部课题(2016YT12)

摘要: 利用NovaSeq6000高通量测序技术对夏季和冬季我国南方某采用活性炭-超滤深度处理工艺自来水厂工艺过程中的细菌群落进行解析,以探究该工艺过程中细菌群落的分布和变化规律。结果表明,出厂水浊度、菌落总数等水质指标均符合国标GB 5749-2006的要求。混凝沉淀、超滤和消毒对细菌群落多样性起到去除作用,且夏季去除率明显高于冬季;夏季和冬季优势菌门均为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)等,但在属水平上细菌群落组成存在明显差异。此外,检测到的条件致病菌属主要包括分支杆菌属(Mycobacterium)和假单胞菌属(Pseudomonas),其在核心微生物中合计占比为5.56%。活性炭-超滤深度处理工艺过程中细菌群落具有明显的时空变化规律。

English Abstract

  • 安全清洁的饮用水与人群健康息息相关,也是我国当前经济社会发展中的重大民生问题之一[1]。饮用水处理工艺经过百余年的发展,特别是消毒工艺的应用,为消除伤寒、霍乱等介水传播疾病做出了重大贡献。但随着检测技术的不断发展,耐氯性条件致病菌在饮用水系统中被不断检出[2-3]。有研究[4]显示,人类仍有50%的疾病与饮用水中病原微生物有关。因此,探究饮用水处理工艺中细菌群落的时空分布与动态变化,对病原微生物控制技术的开发,进而保障人群健康具有重要意义。

    高通量测序因其准确性高、成本低等优点,在供水系统微生物群落解析中应用广泛。目前,已有利用该技术对常规处理工艺[5]、臭氧-生物活性炭深度处理工艺[6]、炭砂滤池处理工艺[7]等工艺过程中细菌群落多样性进行解析的很多案例。但是,针对超滤工艺及其组合净水工艺过程中细菌群落变化的研究却鲜见报道[8]

    本研究以我国南方某基于活性炭-超滤深度处理工艺的自来水厂为采样地,采用NovaSeq6000高通量测序技术对夏季和冬季各工艺单元出水和活性炭生物膜的细菌群落进行解析,以探究细菌群落在工艺过程中的分布与变化规律;并了解主要条件致病菌属的组成,以期为全面保障饮用水安全提供参考。

  • 该自来水厂(以下简称“水厂”)设计规模为40 000 t·d−1,供水面积约4 km2,服务人口约160 000人。水源水来自水库。以机械混合池、穿孔旋流絮凝池、斜管沉淀池、活性炭滤池、超滤膜车间和清水池为主要工艺单元,工艺流程如图1所示。混凝剂选用聚合氯化铝,投加量为1.0~2.0 mg·L−1(以氧化铝计);预氧化剂和消毒剂均采用次氯酸钠,预氧化投加量为0.5~1.0 mg·L−1,主消毒投加量为1.5~2.0 mg·L−1,均以Cl2计。

  • 水样来自GAC-UF各工艺单元的出水,生物膜样品则采集自GAC-UF活性炭滤池中的活性炭,样品采集时各工艺单元设备运行状态良好。采样点如图1所示。样品名称分别为原水、沉后水、炭滤出水、超滤出水、出厂水和活性炭生物膜,对应的夏季(7月份)样品编号为S.RW、S.CSE、S.GACFE、S.UFE、S.FW和S.GACB;对应的冬季样品编号为W.RW、W.CSE、W.GACFE、W.UFE、W.FW和W.GACB。水样采集所用塑料桶须进行灭菌处理,活性炭样品置于无菌袋中。以上样品均需要采集3份平行样品,混合均匀后方可进行样品检测[9]。水样及活性炭样品要及时进行检测,如无条件立即进行检测,需于4 ℃条件下保存,并在24 h内完成检测。活性炭样品的处理步骤参考文献[10]。采用0.22 μm滤膜对水样和活性炭样品的处理上清液进行过滤,直到滤膜无法下滤为止。之后将滤膜置于灭菌处理的离心管中,于−80 ℃条件下保存。

  • 使用HACH HQd多参数水质分析仪对刚采集样品的pH、水温和溶解氧立即进行测定;使用HACH 2100AN浊度分析仪、GE Sievers 5310C总有机碳测定仪、VARIAN CARY50型号紫外-可见分光光度计对浊度、TOC/DOC、UV254进行检测;使用《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750-2006)[11]的方法对总磷、氨氮、高锰酸盐指数(CODMn)、菌落总数等指标进行检测;生物可降解溶解性有机碳(BDOC)测定方法参考文献[12];异养菌平板计数(HPC)参考文献[13]。

  • 首先,各样品的基因组DNA使用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取,采用无菌水将提取获得的DNA稀释至1 ng·μL−1,以此DNA为模板,选择515F和806R等16S V4区引物进行聚合酶链式反应(PCR)。然后,采用琼脂糖凝胶(浓度为2%)对PCR产物进行电泳检测,并用胶回收试剂盒(qiagen公司)对目的条带进行回收。最后,利用TruSeq® DNA PCR-Free Sample Preparation Kit建库试剂盒构建文库,通过Qubit和Q-PCR对文库进行定量,文库确认合格后,在NovaSeq6000平台上进行测序。

  • 在97%一致性水平上,将测序获得的有效数据采用Uparse软件聚类为OTUs(operational taxonomic units)。之后对OTUs通过Mothur方法与SILVA的SSUrRNA数据库注释分析其所代表的物种,并在门、纲、属水平上进行样品的群落组成分析。同时,将数据均一化,以分析细菌群落多样性。

    α多样性指数和PCA分析分别采用Qiime软件(Version 1.7.0)和R软件(Version 2.15.3)完成。

  • 表1为GAC-UF深度处理工艺过程的水质参数变化。通过分析表1可知,出厂水pH、浊度、CODMn、菌落总数等指标均能满足《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)[14]的要求。现行的美国饮用水水质标准中,对HPC的限值是500 CFU·mL−1[15],本研究中两个季节的数据均没有超标;但是,冬季出厂水的HPC已达323 CFU·mL−1。HPC作为微生物学指标,需要引起重视。此外,冬季各工艺单元HPC远高于菌落总数。由于与测定菌落总数的营养琼脂培养基相比,测定HPC的R2A培养基有机物组成更加广泛,更有利于受损细菌的修复生长,因此,冬季更应强化工艺运行,以保障饮用水微生物安全。

    除pH、水温和溶解氧3项指标以外,工艺过程中的其他指标基本呈现下降趋势。其中,夏季和冬季对浊度、氨氮、BDOC、菌落总数的去除率基本相同,且与相关研究结果基本吻合[16]

  • 夏季和冬季的水样、生物膜样品α多样性指数如表2所示。由表2可知,Good’s coverage均在0.98以上。由此可以看出,对于水样、活性炭生物膜样品中细菌群落的覆盖率,16S rRNA测序均能达到较高。

    在水样方面,除在GAC工艺单元有大幅升高外,OTUs和Shannon、Chao1等α多样性指数在活性炭-超滤深度处理工艺过程中整体呈下降趋势,混凝沉淀工艺单元、UF工艺单元和消毒工艺单元对细菌多样性均起到削减作用。此外,夏季对OTUs、Shannon和Chao1的去除率(48.02%、39.68%、53.84%)明显高于冬季(42.57%、21.07%、36.05%)。其主要原因可能是,冬季水温较夏季低10 ℃左右,较低的温度影响了工艺运行效果。以上结果均表现了GAC-UF深度处理工艺中细菌群落明显的时空变化特性。此外,冬季水样和生物膜样品OTUs数目和α多样性指数均高于夏季。HOU等[7]对广州某炭砂滤池处理工艺水厂的研究结果与本文的结果一致;但任红星[17]对我国东部某臭氧-生物活性炭深度处理工艺的研究结果却与本文结果相反。以上内容表明,在不同地域水厂工艺过程中,细菌群落多样性的时间变化特性有所差异,产生这一结果可能与原水(水源水)中的营养物质组成有关[18]

    细菌群落多样性在GAC-UF深度处理工艺过程中整体呈下降趋势,但在GAC单元出水中明显升高,且活性炭生物膜细菌群落多样性亦高于原水。以上结果均表明,GAC滤池中细菌的大量孳生。BOON等[19]的研究也表明GAC滤池出水中大量微生物的存在。混凝沉淀工艺单元、UF工艺单元和消毒工艺单元均对细菌群落多样性起到削减作用,混凝沉淀工艺单元对细菌群落多样性的去除率在20%左右。但是,POITELON等[20]和LIN等[5]的研究结果表明,混凝沉淀工艺单元对细菌群落的影响作用较小,这与本文结果有一定出入。其可能的原因是,本研究中添加了次氯酸钠作为预氧化剂,强化了混凝沉淀工艺对细菌群落的去除。在UF工艺单元,2个季节对细菌多样性的去除作用均较为明显,表明了超滤膜对微生物的有效截留,这与乔铁军等[21]的研究结果一致。消毒工艺单元是保障饮用水微生物安全最主要的屏障,其在夏季对细菌群落多样性的去除率最高,但在冬季去除率较低,这可能与耐氯菌的存在有关。

  • 1)门水平上的细菌群落组成。门水平上的细菌群落组成如图2所示。由图2可知,2个季节水样的主要菌门组成基本相同;不同的是,变形菌门(Proteobacteria)在夏季样品中占绝对优势,而放线菌门(Actinobacteria)在冬季各水样中相对丰度略高于变形菌门(Proteobacteria)。相较各水样而言,在活性炭生物膜样品(S.GACB和W.GACB)中,变形菌门(Proteobacteria)在夏季(60.79%)和冬季(72.15%)均占绝对优势;夏季主要菌门还包括浮霉菌门(Planctomycetes,12.79%)、酸杆菌门(Acidobacteria,5.06%)和奇古菌门(Thaumarchaeota,3.62%),冬季还包括软壁菌门(Tenericutes,4.83%)、放线菌门(Actinobacteria,4.04%)和浮霉菌门(Planctomycetes,3.12%)。

    综上所述,水样和生物膜样品细菌群落组成在门水平上存在一定差异,且生物膜样品差异更为明显;但综合这两种样品来看,占有绝对优势的菌门仍为变形菌门(Proteobacteria)。

    2)属水平上的细菌群落组成。夏、冬两季在属水平上的细菌群落组成如图3所示。由图3可知,在属水平组成上,2个季节的细菌群落组成差异性更为明显,如在S.FW中绝对优势菌属为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas,15.15%),在W.FW中绝对优势菌属为分支杆菌属(Mycobacterium,63.32%)。根据祝泽兵[3]的研究,这2种菌属均具有一定的耐氯性。此外,可能正是由于大量分支杆菌属(Mycobacterium)等耐氯菌的存在,造成了冬季消毒工艺对细菌多样性的去除率较低。

    根据相关研究[22]报道,分支杆菌属(Mycobacterium)和假单胞菌属(Pseudomonas)为条件致病菌属。这2种条件致病菌属在冬季样品中的相对丰度高于夏季,且分支杆菌属(Mycobacterium)在活性炭池中更易孳生,出水丰度较沉淀池出水有所增加,特别是冬季样品增加较多。此外,在常规处理工艺[5]、臭氧-生物活性炭深度处理工艺[6]、炭砂滤池处理工艺[7]中亦发现不动杆菌属(Acinetobacter)、梭菌属(Clostridium)、军团菌属(Legionella)、气单胞菌属(Aeromonas)、沙门菌属(Salmonella)、链球菌属(Streptococcus)等多种条件致病菌属,且在供水管网系统中也有检出[23]。虽然大多数条件致病菌属相对丰度均较低,但其也包含非致病菌种[24],这仍需引起关注,后续应加强致病菌种水平和更有效灭活方式的研究。

  • 采用主成分分析对细菌群落的组成变化进行了研究,结果如图4所示。由图4可知,除冬季超滤出水(W.UFE)外,夏、冬两季样品分别分布在第一主成分(横坐标)两侧,这表明细菌群落组成的季节性变化非常明显。冬季超滤出水(W.UFE)远离所有样品,这说明其与其他样品细菌群落组成差异较大。与冬季相比,夏季各样品之间距离均较远,这说明各工艺单元之间的细菌群落组成差异亦更大。

    为明确工艺过程中的核心微生物,对夏、冬两季工艺水样共有和特有OTUs进行花瓣图分析,结果如图5所示。由图5可知,所有水样共有的OTUs数目是72,这说明一部分细菌不仅稳定存在于水样中,不受季节的影响;而且最终可能会进入龙头水,对人群健康造成危害。在核心微生物72个OTUs中,条件致病菌属分支杆菌属(Mycobacterium)和假单胞菌属(Pseudomonas)所占数目为1和3,所占比例合计为5.56%。

  • 1)出厂水中浊度、菌落总数等水质指标均符合国标GB 5749-2006的要求。

    2)细菌群落多样性在工艺过程中呈明显的时空分布变化,混凝沉淀、UF和消毒是去除细菌群落多样性的主要工艺单元,且夏季去除率明显高于冬季。

    3)主要菌门组成为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)等;在属水平上细菌群落组成差异较大。

    4)条件致病菌属主要包括分支杆菌属(Mycobacterium)和假单胞菌属(Pseudomonas),其在核心微生物中合计占比为5.56%。

参考文献 (24)

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