富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性对水位变化的响应

呼唤, 李丹蕾, 王玉莹, 刘云根, 王妍. 富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性对水位变化的响应[J]. 环境化学, 2021, 40(5): 1452-1463. doi: 10.7524/j.issn.0254-6108.2020112901
引用本文: 呼唤, 李丹蕾, 王玉莹, 刘云根, 王妍. 富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性对水位变化的响应[J]. 环境化学, 2021, 40(5): 1452-1463. doi: 10.7524/j.issn.0254-6108.2020112901
HU Huan, LI Danlei, WANG Yuying, LIU Yungen, WANG Yan. Response of bacterial community structure and diversity in sediment of arsenic-rich lakeside wetland to water level change[J]. Environmental Chemistry, 2021, 40(5): 1452-1463. doi: 10.7524/j.issn.0254-6108.2020112901
Citation: HU Huan, LI Danlei, WANG Yuying, LIU Yungen, WANG Yan. Response of bacterial community structure and diversity in sediment of arsenic-rich lakeside wetland to water level change[J]. Environmental Chemistry, 2021, 40(5): 1452-1463. doi: 10.7524/j.issn.0254-6108.2020112901

富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性对水位变化的响应

    通讯作者: Tel:13577148670, E-mail:henryliu1008@163.com
  • 基金项目:
    国家自然科学基金(41761098,21767027)和云南省基础研究计划(2019FB070)资助

Response of bacterial community structure and diversity in sediment of arsenic-rich lakeside wetland to water level change

    Corresponding author: LIU Yungen, henryliu1008@163.com
  • Fund Project: the National Natural Science Foundation of China(41761098, 21767027)and Basic Research Plan of Yunnan Province(2019FB070)
  • 摘要: 为探究富砷底质下高原湖滨湿地底泥微生物群落对水位变化的响应特征,本研究以室内模拟实验的方式,探讨不同水位条件对富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性的影响。结果表明,细菌丰度、多样性与水位高低具有显著相关性,细菌丰度由多到少排序为:高水位>中水位>无水位,即水位越高,细菌丰度越高,细菌群落多样性则表现为高水位条件下较高;在细菌群落结构中,门水平分类上的5种优势细菌分别为变形菌门、厚壁菌门、绿弯菌门、拟杆菌门和酸杆菌门,各优势菌门对水位条件的响应表现出多样性的特征;纲水平分类上,γ-变形菌纲为优势菌纲,其在不同水位条件下的变化趋势同变形菌门完全一致;在不同水位条件下,总氮(TN)、总磷(TP)、土壤有机碳(SOC)以及硝氮(NO3-N)、氨氮(NH+4-N)含量对底泥中细菌群落的影响显著,其中,总氮(TN)、土壤有机碳(SOC)、硝氮(NO3-N)、氨氮(NH+4-N)对细菌优势群落影响最为显著且呈现出多样性的特征。水位条件对富砷湖滨湿地底泥中细菌群落结构及多样性具有显著影响,该结果可用于进一步发掘细菌群落与环境之间的潜在关系,为高原湖滨湿地的污染防控和治理提供科学依据。
  • 人类活动是造成土壤重金属污染的重要成因,比如:金属冶炼、矿产开采、煤燃烧、汽车尾气排放、污水灌溉等[1]。我国是汞矿资源大国,随着工业化进程的快速发展,化工、医疗等行业对汞的需求量不断增加,而汞矿山开采是其主要来源。虽然矿产资源的开发利用可推动国家和地方的经济发展,但大量的矿产资源开采易使矿区及周边的土壤、地下水以及农作物受到重金属污染[2-5]。大量的研究显示,汞矿区及周边土壤-农作物污染严重,如湘西茶田汞矿区土壤中Hg、Cd、As、Pb、Zn均存在污染,其中Hg和Cd污染较为严重[6];陕西旬阳汞矿区稻田稻米和土壤中Hg含量远超我国农作物和土壤质量标准[7];贵州万山汞矿区土壤中Ni、As、Cd、Hg元素平均含量均超过农用地土壤筛选值,其中Hg元素平均含量超标达70倍[8];贵州丹寨—三都汞矿区土壤中As、Cd、Hg超标率分别达44%、11%、44%,水稻Cd、Cr、Cu、Pb、Zn 等5 种重金属含量超过我国农作物重金属限量标准[9]。重金属进入土壤后因不能被生物降解而长期存在于土壤中且不断积累,不仅影响土壤性质和功能、降低农产品的产量和质量,而且可以通过农作物累积进入食物链,造成当地居民的重金属健康风险[10-11]

    重庆市汞矿的资源优势与贵州、陕西齐名,累计查明汞金属资源储量14271 t,保有资源储量13077 t,列全国第3位[12]。重庆市汞矿集中分布在东南部酉阳、秀山、黔江三区县,矿产地及资源储量均以酉阳县为主,重庆市最大的汞矿(羊石坑汞矿床)位于秀山溪口镇。重庆东南部汞矿储量巨大,对汞矿区周边耕地环境构成了严重威胁,影响着该地区的农业经济发展。1:25万土地质量地球化学调查表明重庆秀山-酉阳地区As、Cd、Hg存在明显的局部聚集[13]。张龙等[14]曾报道秀山汞矿区土壤Hg最高超过土壤环境二级标准值的2倍,并指出矿山的冶炼炉渣和烟道排气是矿区土壤汞的主要来源,而污染大气的汞沉降是下游旱田土壤汞污染的主要途径。李柳[15]评价了秀山溪口乡五龙村汞矿区土壤重金属生态风险,发现全部土壤样品的生态危害程度均为极强。鲍丽然等[16]也指出秀山县西北部汞矿、锰矿区农田土壤As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn等重金属均高于重庆土壤背景值,受开矿影响最明显。但以往的研究主要集中在秀山汞矿区及周围土壤污染和生态风险评价,缺少对酉阳汞矿区的研究,并少有对汞矿区周边农作物开展调查。

    本文通过对重庆东南部汞矿区内主要农作物及其种植土壤的重金属含量进行调查分析,探讨汞矿区土壤、农作物重金属的分布、积累特征,系统分析土壤重金属污染特征和生态风险,并评价食用农作物的人体健康风险,以期为土壤重金属污染防治、区域农产品安全和居民健康生活提供科学依据。

    本研究区位于重庆市东南部,为扬子陆块南部被动边缘褶冲带,古生代碳酸盐岩建造发育,燕山期盖层褶皱发育,并伴随区域性走向断层产生,形成剪切破碎带,为地下水热液成矿创造了良好条件,形成规模较大的汞、铅锌等层控矿床,汞矿主要赋存于寒武系下统清虚洞组的白云岩[17]。秀山-酉阳地区为渝、鄂、湘、黔四省结合部位,地理坐标介于东经108°18′17—109°19′12,北纬28°09′43—29°24′4之间。研究区主要分布属亚热带湿润季风气候,四季分明,气温正常,降水充沛,山地气候垂直分异性明显,立体气候显著。区内喀斯特地貌发育典型,大致分为中山区(800—1895 m)、低山区(600—800 m)和槽谷平坝区(263—600 m)。该区农业生产条件极具优势,为重庆市优质粮食基地县,但区内汞矿分布较多,威胁着周边生态环境(图1)。

    图 1  研究区汞矿、采样点位分布及地质简图
    Figure 1.  Distribution of mercury ore, samples and brief geologic map of the study area

    研究区采集大宗农作物(水稻、玉米和红薯)及其种植土壤样品,采用GPS定位法共采取根系土壤样品95件,水稻45件,玉米32件,红薯18件,其采样点基本均匀分布于农耕区。在每个采样点周围按照梅花点法5点采样,每个点采取农作物100—200 g,组合成1个混合样;并在每个农作物样点用竹铲采集0—20 cm深度内的耕作层根系土壤,混合均匀后采用四分法留取1 kg混合土样。土壤样品在室内自然风干后去除植物根系、砾石等杂质,用玛瑙研钵磨细,置于塑料袋中密封;农作物样品去壳或皮,风干,在送往实验室化验分析。

    对土壤样品进行了pH、As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn等 9项指标的分析,农作物样品进行As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb和Zn 8项指标的分析,所有样品分析均在重庆地质矿产测试中心完成。测试过程严格按照《DZ/T0295—2016 土地质量地球化学评价规范》的有关规定执行。分析指标、测定方法及检出限见表1。准确度和精密度采用国家一级标准物质进行控制,元素分析准确度和精密度合格率均高于98%;元素报出率高于95%。

    表 1  元素分析方法与检出限(mg·kg−1)
    Table 1.  The element analysis methods and detection limit(mg·kg−1)
    指标Indicator测定方法Assay method检出限Detection limit指标Indicator测定方法Assay method检出限Detection limit
    CrX射线荧光光谱法3Cu等离子体发射光谱法1
    PbX射线荧光光谱法2Ni等离子体发射光谱法1
    ZnX射线荧光光谱法1Cd等离子体质谱法0.02
    As原子荧光光谱法0.2pHpH计电极法0.1
    Hg原子荧光光谱法0.0005   
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    采用德国科学家Muller提出的地累积指数法[18],评价土壤重金属的污染水平,计算公式为:

    Igeo=log2[Cik×Si] (1)

    式中,Igeo为重金属i的地累积指数;Ci为土壤中重金属i的实测值;Si为参比值,选用重庆市土壤重金属元素背景值[16]k为修正系数,一般为1.5。重金属地累积指数Igeo分级与污染程度关系如表2所示[19]

    表 2  地累积指数污染程度划分标准
    Table 2.  Igeo index and the criteria of pollution grade
    地累积指数Igeo级别Level污染程度Pollution level
    Igeo<00无污染
    0≤Igeo<11轻污染
    1≤Igeo<22中污染
    2≤Igeo<33中—重污染
    3≤Igeo<44重污染
    4≤Igeo<55重—极重污染
    5≤Igeo6极重污染
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    瑞典著名地球化学家Hakanson[20]提出的潜在生态指数法是目前最为常用的评价土壤重金属污染程度的方法之一,该方法将重金属的含量、重金属的生态效应、环境效应和毒理学效应均联系起来[16, 21-22]。其计算公式如下:

    RI=ni=1Eir=ni=1(Tir×Cif)=ni=1(Tir×CiCin) (2)

    式中,Cfi为某一金属的污染指数;Ci为土壤中某重金属的实测值;Cni为某重金属参比值,采用重庆市土壤重金属背景值[16]Eri为单项重金属潜在生态风险指数;Tri为某重金属的毒性响应参数,各重金属毒性系数为:Zn=1<Cr=2<Cu=Ni=Pb=5<As=10<Cd=30<Hg=40[23];RI 为总的潜在生态风险指数。根据Eri和RI,将单因子潜在生态危害和总潜在生态危害进行分级。因Hakanson 研究的是PCB、Hg、Cd、As、Pb、Cu、Cr 和Zn 等8 种污染物的潜在生态风险,并根据污染物中最大毒性系数( TPCB = THg =40) 和8 种污染物的毒性响应系数之和(133) 提出Eri和RI的分级标准,因此应用RI进行生态风险评价时,必须根据污染种类、数量和毒性系数进行调整。本文根据文献[22]的研究方法对分级标准进行了相应的调整,调整后重金属潜在生态风险指标分级标准如表3所示。

    表 3  土壤重金属潜在生态风险指标分级标准
    Table 3.  Classification criteria of soil heavy metal potential ecological risk index
    潜在生态危害系数(Ei总潜在生态危害系数(RI)潜在生态风险分级Classification of potential ecological risks
    Hakanson本文This studyHakanson本文This study
    Ei <40Ei <40RI <150RI <120轻度生态危害
    40≤ Ei <8040≤ Ei <80150≤ RI <300120≤ RI <240中度生态危害
    80≤ Ei <16080≤ Ei <160300≤ RI <600240≤ RI <480强度生态危害
    160≤ Ei <320160≤ Ei <320600≤ RI <1200480≤ RI <960很强生态危害
    Ei ≥320Ei ≥320RI ≥1200RI≥960极强生态危害
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    长期食用受到重金属污染的农作物,会造成慢性病风险,采用USEPA 公布的健康风险评估模型评价居民食用该区域农作物的健康风险,评价步骤包括暴露计算和风险表征[24]

    ( 1 )暴露计算

    日均暴露剂量(CDI)计算公式为:

    CDI=Ci×IR×EF×EDBW×AT (3)

    式中,CDI为重金属通过农作物的日平均摄入量,(mg·kg−1);Ci为农作物重金属i含量(mg·kg−1);IR为人体每日对农作物的食用量(g·d−1),根据对研究区400人实地问卷调查数据,成人水稻、玉米和红薯的平均摄入量分别为0.300、0.045、0.069 kg·d−1,儿童分别为0.176、0.033、0.046 kg·d−1;其余参数见表4

    表 4  健康风险评价模型参数
    Table 4.  The parameters of health risk assessment model
    评价参数Evaluation patameters成人参考值Adult reference value儿童参考值Reference value of children数据来源Data sources
    EF365 d·a−1365 d·a−1[25]
    ED30 a10 a[26]
    BW70 kg16 kg[25]
    ATED×365ED×365[25]
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    (2) 健康风险表征

    健康风险指数(HQ)计算公式为:

    HQ=CDIRfD (4)
    THQ=ni=1HQ (5)

    式中,HQ为单一重金属的健康风险指数;THQ为多种重金属总健康风险指数;RfD为重金属暴露参考剂量[mg·(kg·d)−1],As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn的RfD取值分别为0.0003、0.001、1.5、0.04、0.0003、0.02、0.004、0.3[25-26]。如果THQ≤1表明没有明显的健康影响;THQ>1表明对人体健康产生影响的可能性大;THQ>10表明存在慢性毒性效应。

    元素富集系数是农作物样品某元素含量与根系土中对应元素含量的比值,反映出植物对土壤中元素的吸收富集能力,可用来表征元素的生物有效性[27],计算式如下:

    K=Cplant/Csoil (6)

    式中,K 表示元素的富集系数;Cplant为重金属元素在作物中的含量,单位为mg·kg−1Csoil为重金属元素在根系土中的含量,单位为mg·kg−1

    研究区土壤pH值在4.33—8.22范围内,平均值为6.34,整体处于偏酸性水平。如表5所示,水稻田、玉米地和红薯地土壤重金属平均含量由高至低依次均为Zn>Cr>Pb>Ni>Cu>As>Hg>Cd,并均高于重庆市土壤背景值,表明重金属在土壤中都有一定程度的累积。水稻田、玉米地和红薯地土壤Hg含量分别为0.088—46.5、0.115—432 、0.112—115 mg·kg−1,平均含量分别是重庆土壤背景值的62、261、132倍;Cd和As平均值分别为0.752、0.817、1.07 mg·kg−1和14.9、19.7、22.9 mg·kg−1,是重庆土壤背景值的2—4倍;Cu、Pb、Zn、Cr和Ni是重庆土壤背景值的1—2倍左右,显然土壤中Hg积累效应最明显,Cd、As次之。对比水稻田、玉米地和红薯地,As、Cd、Cr、Ni、Zn的平均含量为红薯地>玉米地>水稻田;Cu和Hg的平均含量为玉米地>红薯地>水稻田;Pb的平均含量为红薯地>水稻田>玉米地。

    表 5  研究区土壤重金属含量特征(mg·kg−1)
    Table 5.  Concentrations distribution of heavy metals in soil(mg·kg−1)
    耕地Farland统计值StatisticAsCdCrCuHgNiPbZnpH
    水稻田Paddy field最小值Minimun4.240.27344.5170.0881819.679.24.78
    最大值Maximum57.82.0213955.646.571.575.3165.57.97
    平均值Average14.90.75280.433.14.3137.345.01176.37
    几何平均值Geometric mean12.60.67379.131.91.1236.343.81156.31
    变异系数Variable coefficient0.6830.5130.1880.2922.180.2540.2470.1820.135
    玉米地Corn field最小值Minimun5.670.21740.516.20.11518.527.767.94.33
    最大值Maximum44.62.411596.84326578.72208.22
    平均值Average19.70.81781.4391839.144.21226.13
    几何平均值Geometric mean18.10.70379.634.70.88137.342.91176.02
    变异系数Variable coefficient0.4150.6140.2070.5364.240.310.2550.2910.198
    红薯地Sweet potato field最小值Minimun8.030.33549210.1122526.978.95.1
    最大值Maximum50.22.8210375.611570.91193158.08
    平均值Average22.91.0783.336.69.1741.347.51386.64
    几何平均值Geometric mean20.80.90581.934.40.96139.644.61296.59
    变异系数Variable coefficient0.4680.6110.170.3932.940.3150.4410.4150.129
    参照值Reference value重庆土壤背景值Soil background value of Chongqing6.620.2874.424.60.06931.628.181.9
    土壤环境质量标准值Environmental quality standard for soils30a0.3 a150 a50 a0.5 a60 a70 a200 a
    30 b0.3 b150 b50 b0.5 b70 b90 b200 b
    25 c0.3 c200 c100 c0.6 c100 c120 c250 c
    20 d0.6 d250 d100 d1 .0d190 d170 d300 d
      注:1) pH和变异系数无量纲;2)土壤环境质量标准值来源于《土壤环境质量标准 农用地土壤污染风险管控标准(试行)》( GB15618—2008) 二级标准,a 为土壤pH< 5.5,b 为pH 介于5.5—6.5 之间,c 为土壤pH 介于6.5—7.5 之间,d 为土壤pH>7.5时分别对应的质量标准.  Note: 1) pH and coefficient of variation are dimensionless; 2) The standard value of soil environmental quality originates from the secondary standard of soil environmental quality standard (GB15618—2008) , a is soil pH< 5.5,b is pH between 5.5 and 6.5, c is soil pH between 6.5and 7.5, and d is the corresponding quality standard when soil pH>7.5.
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    变异系数可以反映人为活动对环境的干扰程度,变异系数小于0.1为弱变异,0.1—0.3之间为中变异,大于0.3为强变异[28]。从变异系数来看,Hg明显高于其它元素,水稻田、玉米地和红薯地变异系数分别达到2.18、4.24、2.94。此外,水稻田As、Cd变异系数较高,分别为0.683、0.513;玉米地Cd、Cu、As变异系数较高,分别为0.614、0.536和0.415;红薯地Cd、As、Pb、Zn、Cu变异系数较高,分别为0.611、0.468、0.441、0.415、0.393。变异系数越大,元素在土壤中分布越不均匀,受人类活动影响越大,研究区土壤中Hg元素(变异系数均大于1)受区域汞矿开采等影响最大,其次是Cd、As。

    与土壤环境质量标准值对比,研究区耕地土壤中Cr均未超标,Pb有1个样品超标,Ni、Zn、Cu有少量样品超标,Cd、Hg、As则存在较多样品超标,Cd最高值是标准值的7.82倍,Hg最高值超出标准值的100倍以上,As最高值是标准值的2.51倍(图2)。其中水稻田中Cd、Hg、As分别有40、28、5件样品超过农用地土壤筛选值,超标率分别为88.9%、62.2%、11.1%;玉米地中Cd、Hg、As分别有26、14、6件样品超过农用地土壤筛选值,超标率分别为81.3%、43.8%、18.8%;红薯地中Cd、Hg、As分别有18、8、3件样品超过农用地土壤筛选值,超标率分别为100%、44.4%、16.7%。因此,Cd、Hg、As是该区土壤主要超标元素,尤其是Cd超标率均大于80%,对周边生态环境、农作物安全和人体健康带来危害的可能性较大。

    图 2  研究区耕地土壤重金属分布箱式图
    Figure 2.  Box-plots of heavy metals concentrations in the study area

    研究区农作物水稻中重金属含量由高至低依次为Zn>Cu>Ni>Cr>Cd>As>Pb>Hg;玉米种重金属含量由高至低依次为Zn>Cu>Ni>Cr>Cd>Pb>As>Hg;红薯中重金属含量由高至低依次为Zn>Cu>Ni>Cr>Pb>Cd>As>Hg,水稻、玉米和红薯中Zn的含量都是最大,其次为Cu、Ni、Cr,而Hg含量最低。水稻中重金属As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn的平均值分别为0.159、0.202、0.269、2.239、0.005、0.473、0.048、19.6 mg·kg−1;玉米中重金属As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn的平均值分别为0.007、0.058、0.178、1.768、0.003、0.482、0.045、18.2 mg·kg−1;红薯中重金属As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn的平均值分别为0.029、0.065、0.525、4.803、0.004、0.659、0.133、7.069 mg·kg−1。研究区农作物绝大多数重金属变异系数均大于0.3(表6),因此认为研究区内农作物中重金属来源受外界干扰较大,可能与研究区矿产开采等人为活动有关。

    表 6  研究区农作物重金属含量特征
    Table 6.  Concentrations distribution of heavy metals in crops
    农作物Crop元素Element极小值/(mg·kg−1)Minimum极大值/(mg·kg−1)Maximum均值/(mg·kg−1)Average标准差/(mg·kg−1)Standard deviation变异系数/%Coefficient of variation富集系数/%Concentration coefficientGB2762—2017/(mg·kg−1)
    水稻RiceAs0.0440.420.1590.1010.6350.0130.5
    Cd0.0041.380.2020.3391.6830.2760.2
    Cr0.0510.6180.2690.1720.640.0041
    Cu0.474.622.2391.0130.4530.073
    Hg0.0020.010.0050.0020.450.0090.02
    Ni0.1521.480.4730.2990.6310.011
    Pb0.0220.0950.0480.0170.360.0010.2
    Zn12.32519.62.8170.1440.173
    玉米CornAs00.010.0070.0040.6190.00020.5
    Cd0.0060.2020.0580.0510.8830.060.1
    Cr0.0530.5140.1780.1210.6810.0021
    Cu1.072.81.7680.4710.2660.055
    Hg0.0010.0050.0030.0010.2910.0040.02
    Ni0.141.5880.4820.3090.640.01
    Pb0.0270.0720.0450.0160.360.00020.2
    Zn13.2525.918.172.6170.1440.16
    红薯SweetpotatoAs0.0090.0880.0290.0280.9560.0010.5
    Cd0.0080.1890.0650.050.7630.0770.1
    Cr0.042.010.5250.5120.9750.0051
    Cu1.69.624.8032.7410.5710.156
    Hg0.0010.0080.0040.0020.6060.0090.02
    Ni0.161.550.6590.3680.5580.014
    Pb0.020.4030.1330.1260.9510.0030.2
    Zn214.47.0693.9990.5660.059
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    在所采集的所有农作物样品中,除水稻Cd以外,其余农作物重金属元素的平均含量均未超过《食品安全国家标准 食品中污染物限量》(GB2726—2017)中的标准限值(表6)。水稻中Cd超标率为20%,As、Cr、Hg和Pb均没有点位超标;玉米中部分点位的Cd含量超标,超标率为15.6%,其余元素均未超标;红薯中部分点位Cd、Cr和Pb含量超标,超标率分别为22.2%、5.56%和27.8%。综合重金属含量、重金属超标种类和超标率等指标可知,研究区农作物受Cd污染的风险最高,这与Cd较高的迁移能力有关[29];红薯污染程度最高,玉米受污染程度最低,可以通过调整种植结构,提高土地利用效率,改善农作物质量。

    表6所示,水稻中重金属元素富集系数大小顺序为Cd>Zn>Cu>As>Ni>Hg>Cr>Pb;玉米中重金属元素富集系数大小顺序为Zn>Cd>Cu>Ni>>Hg>Cr>Pb>As;红薯中重金属元素富集系数大小顺序为Cu>Cd>Zn>Ni>Hg>Cr>Pb>As。8种重金属元素在水稻、玉米和红薯中Cd、Zn和Cu的富集系数较高(图3),Zn、Cu 是农作物的营养元素,农作物对其有一定的需求量,故Zn、Cu 在农作物中吸收能力较强;Cd 在土壤中有较强的可移动性,且作物对Cd 有较强的吸收能力,同时Cd 在偏酸性土壤中溶解度增大,而研究区整体处于偏酸性水平,增强了Cd迁移富集能力[30]。此外,水稻中As的富集系数也较高,由于淹水稻田的厌氧条件和水稻对三价As较强的吸收能力,导致水稻中积累了较高含量的As[29]。而水稻、玉米和红薯中Cr、Hg、Pb的富集系数较低,研究表明长期施肥使Cr的有效性在逐步降低,从不稳定形态(可交换态和碳酸盐结合态)向较为稳定的形态转化(铁锰氧化物结合态和有机结合态),造成Cr不易向农作物中迁移[31];相对土壤中其他形态Hg而言,有机-硫化态Hg的生物可利用性强,研究区Hg的富集系数较低可能与矿区土壤中酸交换态Hg含量较低并且变幅较大有关[32]。土壤中Pb主要以不易溶于水的Pb(OH)2、PbCO3、PbSO4形式存在,土壤的有机质含有能大量吸附土壤中Pb+的腐殖质,使得Pb在土壤中大量沉积富集,阻碍了作物对Pb的吸收[33]

    图 3  研究区不同农作物重金属富集系数
    Figure 3.  Enrichment factor of heavy mental in different crops of the study area

    利用式(1)对研究区土壤重金属污染程度进行地累积指数评价,重金属污染指数平均值从高至低顺序为Hg>Cd>As>Pb>Zn>Cu>Ni>Cr(表7)。土壤Hg污染最严重,几乎所有土壤样都受到不同程度的Hg污染,其中中污染和极重污染样品较多,分别占样本总数的24.2%和23.2%,轻污染、中—重污染、重污染和重—极重污染分别占16.8%、12.6%、14.7%和7.37%,只有1件样品呈无污染状态。As、Cd的地累积指数均值介于0—1之间,总体处于轻污染水平,部分样品As和Cd达到中—重污染。Cr、Cu、Ni、Pb、Zn总体呈无—轻污染状态,极少数样品达到中污染。因此,研究区土壤Hg污染现象最为突出,污染程度重、样品多。

    表 7  土壤重金属污染地累积指数分级
    Table 7.  The classification of heavy metals in soil based on the Igeo
    元素Element指数均值Index of average各级样本数Samples of all levels
    无污染Non-pollution轻污染Mild pollution中污染Middle pollution中—重污染Middle-heavy pollution重污染Heavy pollution重—极重污染Heavy-extreme pollution极重污染Extreme pollution
    As0.6591948235000
    Cd0.7831447277000
    Cr−0.48492300000
    Cu−0.149613040000
    Hg3.275116231214722
    Ni−0.349702000000
    Pb0.05534110000
    Zn−0.055583610000
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    以重庆市土壤背景值作为参比值,利用式(2)对研究区土壤开展潜在生态危害风险评价(表8)。从单项重金属潜在生态风险看,全部样品的Cr、Cu、Ni、Pb和Zn生态风险指数均小于40,为轻微生态风险;As风险指数范围为6.40—87.2,存在轻微至强生态风险,以轻微风险为主,占84.2%;Cd风险指数范围为23.3—302,存在轻微至很强的生态风险,以中等风险和强等风险为主,分别占45.3%和37.9%;Hg风险指数范围为51.2—250584,存在中等至极强生态风险,以极强风险为主,占54.7%;因此,Hg、Cd为研究区土壤主要生态危害元素,As也有较轻的生态危害风险。

    表 8  土壤重金属的潜在生态危害指数统计
    Table 8.  Potential ecological risk coefficient for every heavy metal in soil
    危害指数Hazard index分布范围Distribution range各级样本数Samples of all levels
    轻微Mild中Middle强Heavy很强Very heavy极强Extreme
    EiAs6.40—87.28014100
    Cd23.3—30210433390
    Cr1.09—3.73950000
    Cu3.29—19.7950000
    Hg51.2—25058407211552
    Ni2.84—11.3950000
    Pb3.49—21.1950000
    Zn0.830—3.85950000
    RI131—25075701532480
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    研究区重金属总的潜在生态指数RI分布范围为131—250757,存在中等至很强的生态风险,以强风险和很强风险为主,所占比例分别为33.7%和50.5%。RI空间分布图(图4)显示,研究区大部分地区处于强—很强风险,土壤生态风险与汞矿区分布基本一致,西北部和东南缘距离汞矿区较远,生态风险最低,表现为中等或轻微强度。

    图 4  研究区土壤生态风险等级分布图
    Figure 4.  The spatial distribution of total potential ecological grade

    利用USEPA推荐的健康风险模型分别计算研究区成人和儿童通过食用农作物摄入重金属的风险值(HQ),3种不同农作物不同重金属的健康风险评价结果见表9。由表9可知,就单一重金属的HQ而言,3种不同农作物的健康风险有较明显的差异,水稻为As>Cd>Zn>Cu>Ni>Hg>Pb>Cr;玉米为Zn>Cu>Cd>Ni>As>Hg>Pb>Cr;红薯为Cu>As>Cd>Pb>Ni>Zn>Hg>Cr。无论成人还是儿童,除水稻As的HQ>1,其余食用农作物摄入重金属的风险平均值小于1,说明研究区居民食用水稻存在较高的As风险。食用农作物水稻、玉米和红薯,儿童重金属单项风险指数均高于成人,受危害的可能性更大。重金属在农作物中并不是单一存在的,二是共同存在于农作物中,复合健康风险评价结果,表现为水稻>红薯>玉米。成人食用水稻和红薯的THQ>1,说明对人体健康产生影响的可能性大;食用玉米的THQ<1,说明对人体没有明显的健康影响。儿童食用水稻、玉米和红薯的THQ均大于1,尤其是食用水稻(THQ平均值达到9.86)存在明显的复合健康风险,应引起重视。

    表 9  土壤重金属健康风险指数
    Table 9.  Health risk index of heavy metals in soil
    类型Type农作物CropsHQTHQ
    AsCdCrCuHgNiPbZn
    成人Adult水稻2.2720.8640.0010.2400.0680.0830.0330.2803.842
    玉米0.0500.1800.0010.1890.0250.0810.0090.2600.794
    红薯0.3020.2800.0010.5150.0370.1100.1340.1011.480
    儿童Children水稻5.8322.2180.0020.6160.1750.2140.0850.7199.860
    玉米0.1290.4610.0010.4860.0630.2070.0230.6662.038
    红薯0.7750.7190.0031.3210.0960.2820.3440.2593.799
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    (1) 重庆市汞矿区水稻田、玉米地和红薯地土壤中As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn等重金属均高于重庆土壤背景值,Hg元素最为突出,且变异系数大,受开矿影响最明显,其次是Cd、As。与国家农用地土壤污染风险筛选值相比,Cd、Hg、As是研究区土壤主要超标元素,可能会产生生态健康危害。

    (2) 研究区水稻、玉米和红薯中Zn的含量都是最大,其次为Cu、Ni、Cr,Hg含量最低。与食品安全国家标准相比,水稻和玉米中Cd超标,超标率分别为20%、15.6%;部分红薯中Cd、Cr和Pb超标,超标率分别为22.2%、5.56%和27.8%。

    (3) 地累积指数评价结果显示,该区土壤Hg污染现象最为严重,以中污染和极重污染为主,As、Cd总体处于轻污染水平,Cr、Ni、Cu、Pb、Zn总体呈无—轻污染状态。

    (4) 重金属潜在生态风险评价结果表明,研究区土壤潜在重金属生态危害主要表现为Hg、Cd和As,Hg以极强风险为主,Cd以中等风险和强等风险为主,As以轻微风险为主,其余重金属危害不明显。研究区大部分地区处于强—很强风险,土壤生态风险与汞矿区分布基本一致,西北部和东南缘距离汞矿区较远,生态风险最低。

    (5) 单一重金属健康风险指数表明研究区居民食用水稻存在较高的As风险;多种重金属总健康风险指数显示成人食用玉米没有明显的健康影响,但食用水稻、红薯存在明显的复合健康风险;同时儿童更易受到重金属污染威胁,食用水稻、玉米和红薯的THQ均大于1,尤其是食用水稻(THQ平均值达到9.86)存在明显的复合健康风险,应引起重视。

  • 图 1  不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中细菌门水平分类

    Figure 1.  Bacterial phyla level classification in sediments of arsenic-rich lakeside wetland under different water levels

    图 2  不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中细菌属水平分类

    Figure 2.  Bacterial genus level classification in sediments of arsenic-rich lakeside wetland under different water levels

    图 3  基于微生物群落在不同分类水平上的LEFSe分析

    Figure 3.  LEFSe analysis based on microbial communities at different taxonomic levels

    图 4  不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中细菌门分类群落与化学指标的冗余分析

    Figure 4.  Redundancy analysis of bacterial community and chemical indexes in sediment of arsenic-rich lakeside wetland under different water levels

    表 1  实验样品指标测定方法

    Table 1.  Determination methods of experimental sample indexes

    指标Index测定方法Determination method仪器名称Instrument name型号Model公司Company
    TN凯氏定氮法(LY/T 1228—1999)全自动凯氏定氮仪KDN-1000上海昕瑞仪器有限公司
    TAs(3∶1)王水消解提取法(NY/T 1121.11-2006)原子荧光光度计PF3北京普析通用仪器有限公司
    TP钼锑抗分光光度法(LY/T 1228—1999)紫外可见光光度计T6新世纪北京普析通用仪器有限公司
    SOC重铬酸钾氧化—外加热法(LY/T 1237—1999)电热恒温油浴锅HWS-26上海一恒科技仪器有限公司
    指标Index测定方法Determination method仪器名称Instrument name型号Model公司Company
    TN凯氏定氮法(LY/T 1228—1999)全自动凯氏定氮仪KDN-1000上海昕瑞仪器有限公司
    TAs(3∶1)王水消解提取法(NY/T 1121.11-2006)原子荧光光度计PF3北京普析通用仪器有限公司
    TP钼锑抗分光光度法(LY/T 1228—1999)紫外可见光光度计T6新世纪北京普析通用仪器有限公司
    SOC重铬酸钾氧化—外加热法(LY/T 1237—1999)电热恒温油浴锅HWS-26上海一恒科技仪器有限公司
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    表 2  不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥的污染特征

    Table 2.  Pollution characteristics of sediment in arsenic-rich lakeside wetland under different water levels

    不同水位条件Different water levelsTN/(mg·kg−1NO3-N/(mg·kg−1NH+4-N/(mg·kg−1TP/(mg·kg−1TAs/(mg·kg−1SOC/(g·kg−1
    生长期无水位1006.13±7.64i383.23±0.57f683.61±4.68d1738.73±9.44a222.80±9bcd15.75±0.13c
    中水位1262.80±5.60f379.70±0.74g756.94±21.77c1475.74±9.63c239.63±9.47abc20.50±0.27a
    高水位1219.87±16.19f379.11±0.45g776.56±14.47c1629.18±6.73b200.45±4.32de16.24±0.03b
    繁盛期无水位1538.13±10.78d515.09±0.57d841.84±28.76b1642.01±7.38b271.50±1.58a14.13±0.06d
    中水位1167.60±30.8g514.75±0.92d903.71±14.02b1130.51±19.86f249.69±0.41ab6.93±0.12h
    高水位1067.73±15.70h510.93±0.17e908.42±14.48b1244.07±3.86e208.22±16.28cde7.13±0.12h
    枯落期无水位2375.33±19.42a586.67±0.11a873.72±14.95b1117.87±21.36f190.63±9.27de8.28±0.13f
    中水位1957.20±10.10b583.23±0.58b976.56±14.17a1109.37±9.38f145.33±13.24f7.60±0.07g
    高水位1896.53±12.13c579.58±0.49c992.87±13.33a1367.42±11.78d183.56±2.35e8.48±007f
      注:表中数据为平均值±标准差,同一列不同字母表示显著性差异(P<0.05).  Note: The data in the table is the average ± standard deviation, and different letters in the same column indicate significant differences (P<0.05).
    不同水位条件Different water levelsTN/(mg·kg−1NO3-N/(mg·kg−1NH+4-N/(mg·kg−1TP/(mg·kg−1TAs/(mg·kg−1SOC/(g·kg−1
    生长期无水位1006.13±7.64i383.23±0.57f683.61±4.68d1738.73±9.44a222.80±9bcd15.75±0.13c
    中水位1262.80±5.60f379.70±0.74g756.94±21.77c1475.74±9.63c239.63±9.47abc20.50±0.27a
    高水位1219.87±16.19f379.11±0.45g776.56±14.47c1629.18±6.73b200.45±4.32de16.24±0.03b
    繁盛期无水位1538.13±10.78d515.09±0.57d841.84±28.76b1642.01±7.38b271.50±1.58a14.13±0.06d
    中水位1167.60±30.8g514.75±0.92d903.71±14.02b1130.51±19.86f249.69±0.41ab6.93±0.12h
    高水位1067.73±15.70h510.93±0.17e908.42±14.48b1244.07±3.86e208.22±16.28cde7.13±0.12h
    枯落期无水位2375.33±19.42a586.67±0.11a873.72±14.95b1117.87±21.36f190.63±9.27de8.28±0.13f
    中水位1957.20±10.10b583.23±0.58b976.56±14.17a1109.37±9.38f145.33±13.24f7.60±0.07g
    高水位1896.53±12.13c579.58±0.49c992.87±13.33a1367.42±11.78d183.56±2.35e8.48±007f
      注:表中数据为平均值±标准差,同一列不同字母表示显著性差异(P<0.05).  Note: The data in the table is the average ± standard deviation, and different letters in the same column indicate significant differences (P<0.05).
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    表 3  不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中细菌丰度及多样性指数

    Table 3.  Bacterial abundance and diversity index in sediment of arsenic-rich lakeside wetland under different water levels

    不同水位条件Different water levels97% 相似水平Similarity
    序列ReadsOUT数OTUs覆盖率CoverageChaol指数Chaol index香农指数Shannon index辛普森指数Simpson index
    生长期无水位3074023800.979729116.50320.0044
    中水位3762123900.983029526.31120.0049
    高水位5483129490.989333256.52110.0041
    繁盛期无水位5047223770.987828785.96510.0078
    中水位3947427020.984033166.51340.0048
    高水位3334526990.987235186.45100.0060
    枯落期无水位2817218440.983522476.16220.0062
    中水位3728923450.988926386.15740.0067
    高水位3928924430.985528416.50830.0039
    不同水位条件Different water levels97% 相似水平Similarity
    序列ReadsOUT数OTUs覆盖率CoverageChaol指数Chaol index香农指数Shannon index辛普森指数Simpson index
    生长期无水位3074023800.979729116.50320.0044
    中水位3762123900.983029526.31120.0049
    高水位5483129490.989333256.52110.0041
    繁盛期无水位5047223770.987828785.96510.0078
    中水位3947427020.984033166.51340.0048
    高水位3334526990.987235186.45100.0060
    枯落期无水位2817218440.983522476.16220.0062
    中水位3728923450.988926386.15740.0067
    高水位3928924430.985528416.50830.0039
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-11-29
  • 刊出日期:  2021-05-27
呼唤, 李丹蕾, 王玉莹, 刘云根, 王妍. 富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性对水位变化的响应[J]. 环境化学, 2021, 40(5): 1452-1463. doi: 10.7524/j.issn.0254-6108.2020112901
引用本文: 呼唤, 李丹蕾, 王玉莹, 刘云根, 王妍. 富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性对水位变化的响应[J]. 环境化学, 2021, 40(5): 1452-1463. doi: 10.7524/j.issn.0254-6108.2020112901
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Citation: HU Huan, LI Danlei, WANG Yuying, LIU Yungen, WANG Yan. Response of bacterial community structure and diversity in sediment of arsenic-rich lakeside wetland to water level change[J]. Environmental Chemistry, 2021, 40(5): 1452-1463. doi: 10.7524/j.issn.0254-6108.2020112901

富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性对水位变化的响应

    通讯作者: Tel:13577148670, E-mail:henryliu1008@163.com
  • 1. 西南林业大学生态与环境学院,昆明,650224
  • 2. 云南省山地农村生态环境演变与污染治理重点实验室,昆明,650224
基金项目:
国家自然科学基金(41761098,21767027)和云南省基础研究计划(2019FB070)资助

摘要: 为探究富砷底质下高原湖滨湿地底泥微生物群落对水位变化的响应特征,本研究以室内模拟实验的方式,探讨不同水位条件对富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构及多样性的影响。结果表明,细菌丰度、多样性与水位高低具有显著相关性,细菌丰度由多到少排序为:高水位>中水位>无水位,即水位越高,细菌丰度越高,细菌群落多样性则表现为高水位条件下较高;在细菌群落结构中,门水平分类上的5种优势细菌分别为变形菌门、厚壁菌门、绿弯菌门、拟杆菌门和酸杆菌门,各优势菌门对水位条件的响应表现出多样性的特征;纲水平分类上,γ-变形菌纲为优势菌纲,其在不同水位条件下的变化趋势同变形菌门完全一致;在不同水位条件下,总氮(TN)、总磷(TP)、土壤有机碳(SOC)以及硝氮(NO3-N)、氨氮(NH+4-N)含量对底泥中细菌群落的影响显著,其中,总氮(TN)、土壤有机碳(SOC)、硝氮(NO3-N)、氨氮(NH+4-N)对细菌优势群落影响最为显著且呈现出多样性的特征。水位条件对富砷湖滨湿地底泥中细菌群落结构及多样性具有显著影响,该结果可用于进一步发掘细菌群落与环境之间的潜在关系,为高原湖滨湿地的污染防控和治理提供科学依据。

English Abstract

  • 湖滨湿地作为水陆交界地带,是各种微生物生存和繁衍的重要场所[1-2]。近年来,砷污染给我国地表水环境安全带来严重威胁[3-4],湖泊、河流、水库等已受到不同程度的砷污染,高原湖滨湿地因其脆弱的生态环境,面临着更高的砷污染风险[5]。微生物是湿地生态系统的重要分解者,对湿地生态系统中的能量流动及物质循环具有关键作用[6],微环境的变化对其影响显著,同时,微生物群落结构和多样性也会随着环境的变化而改变,可有效指示湿地生态环境的变化[7-9]。目前,湿地微生物群落的研究开始受到广泛关注,国内外大量学者已经证实,微生物能够通过同化和异化等作用改变环境条件,进而影响矿质元素的生物地球化学循环(如C、N、P等)、能量流动以及污染物的形态和降解(如重金属、有机污染物等),对湿地生态系统的稳定产生显著影响[10-12]

    我国学者对湿地微生物群落结构及多样性的研究主要集中在鄱阳湖、太湖、巢湖等富营养化湖泊[13-15],对三峡库区消落带的微生物群落结构及多样性也有一定研究[16],于小彦等通过室内模拟实验发现水分条件是左右生物碳添加对湿地微生物群落影响的重要因子[15],钢迪嘎等以密云水库消落带为研究对象,发现水位变化能够显著影响消落带土壤中氨氧化细菌和古菌的多样性、丰度[17]。然而,在研究高原湖滨湿地底泥中微生物群落结构及多样性上,多关注重金属污染及外界干扰方式对底泥中微生物群落结构的影响[18],水位条件的变化对富砷湖滨湿地底泥中细菌群落结构及多样性的影响尚不明确。

    本文探究了不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中微生物群落结构及多样性特征,以期明晰微生物群落结构及多样性对于水位变化的响应关系,这有助于分析湿地底泥微生物与湿地环境变化之间的关系,进一步探明湿地生态系统中各元素的迁移与转化,为湿地生态环境保护与合理治污提供理论指导。

  • 本试验采取室内模拟湿地的方式,设置3种水位条件:a. 高水位(淹水15 cm),b. 中水位(淹水7 cm),c. 无水位(保持湿润即可),每种水位条件设置9组平行,共27个处理。试验在西南林业大学农村污水处理研究所温室进行,以黑色聚乙烯桶(高32 cm,内口径44 cm,底径32 cm)内栽植湿地植物的方式人工模拟湿地,底泥取自云南省昆明市盘龙区金汁河底泥(0—20 cm),挺水植物选择常见的湿地植物狭叶香蒲,购自云南省昆明市泛亚苗圃基地,使用Na2HAsO4·7H2O(分析纯)模拟富砷环境,砷的底泥含量为300 mg·kg−1[19]

    具体操作如下:将沟渠底泥剔除石块及植物根茎等杂物之后,混合均匀,通过外源添加Na2HAsO4·7H2O(以As计)的方式设置富砷底质,将富砷底泥加至黑色聚乙烯实验桶12 cm处,放置平衡后栽种狭叶香蒲幼苗。水位通过每周定量加水保持在设定高度,待香蒲稳定2个月后,进行实验样品采集。

  • 本试验分别于湖滨湿地典型挺水植物香蒲的生长期、繁盛期、枯落期对底泥进行破坏性采样。对香蒲叶、茎进行收割后,桶中淹水采用虹吸式排水方式抽出,底泥样品采自植物根系区,每种水位条件均随机采集3个平行作为重复,剔除植物根系之后混合均匀,将混匀后的底泥样品分为两部分:①用于Illumina PE250高通量测序,样品以干冰低温保存送往上海凌恩生物科技有限公司进行微生物测序工作;②用于污染指标测定,将样品装入自封袋带回实验室,放置阴凉处自然风干后研磨,过160目孔筛,实验待用。

  • 本实验研究测定的指标包括:总氮(TN)、总磷(TP)、土壤有机碳(SOC)、总砷(TAs),测定方法如表1所示。

  • 本模拟实验中所有样品的Illumina PE250测序工作由上海凌恩生物科技有限公司完成,利用1%琼脂糖凝胶电泳抽取基因组DNA,每个样本3个平行,将同一样本的PCR产物混合后用2%琼脂糖凝胶电泳检测,使用AxyPrepDNA凝胶回收试剂盒(AXYGEN公司)切胶回收PCR产物,Tris_HCl洗脱;2%琼脂糖电泳检测。将PCR产物用QuantiFluorTM -ST蓝色荧光定量系统(Promega公司)进行检测定量,按照每个样本的测序量要求,进行相应比例的混合,随后进行文库构建,检验合格之后使用Illumina PE250进行上机测序。

  • 采用Excel 2016 对原始数据进行基础性处理;利用SPSS 26对数据进行显著性分析。利用单因素方差分析检验不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中环境条件及污染特征的差异性(One-way-ANOVA, P < 0.05),平均数之间的多重比较采用LSD检验。文中所有堆积柱状图均由Origin 2018绘制完成,用以表示不同分类水平下细菌群落的组成情况;使用LEFSe识别不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中的关键差异微生物,利用Canoco 5进行冗余分析(RDA),比较底泥污染指标和细菌群落之间的相关性。

  • 表2可知,水位条件的变化是影响湿地生态系统的主要因子,不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中TN、TP、TAs和SOC具有显著差异(P<0.05),其中,TN含量在不同水位条件下的变化总体表现为:无水位<中水位<高水位,NH+4-N含量的变化趋势同TN基本一致;随水位的升高呈增加的趋势,NO3-N含量则表现为:无水位<中水位<高水位无水位;TP含量均表现为中水位条件显著低于无水位条件和高水位条件;TAs含量则随植物生长而减少,对比无水位条件而言,高水位条件下其含量相对较低;SOC含量则表现为繁盛期、枯落期中水位条件显著低于无水位条件和高水位条件。

  • 运用Chaol指数(Chaol index)、Shannon指数(Shannon index)和Simpson指数(Simpson index)对不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中细菌丰度及多样性进行分析。由表3可知,各样品文库的覆盖率(Coverage)范围为97.97%—98.93%,表明本次测序结果能够有效反应湿地底泥中细菌群落的基本情况。Chao1 指数反应的细菌群落丰度变化规律一致,均为:无水位<中水位<高水位,即在实验范围内,淹水程度越大,其菌群丰度越高,这表明水位变化对底泥细菌丰度的影响显著。Shannon指数与Simpson指数通常用于表示α多样性指数,Shannon指数值越大,湿地底泥中细菌群落多样性就越高,Simpson指数则与之相反。Shannon指数和Simpson指数反应的细菌多样性表现为,细菌多样性程度较高的状态以高水位条件居多,例如,Shannon指数均为在生长期和枯落期的高水位条件下最大,Simpson指数则与之相反,这一结果表明,与无水位条件下的细菌多样性相比,水位条件对底泥细菌多样性有显著影响。

    湿地底泥是各种微生物参与、物质发生频繁交换、具有高度生活活性的特殊生物环境[20],而微生物种类多、分布广、代谢强、繁殖快,被认为是土壤生态系统中最活跃的部分,对外界环境干扰的响应十分敏感。水位条件是影响湿地生态过程的关键因素[21],很多研究表明,淹水程度的变化对土壤微生物群落有重要影响[22-23]。王鹏等通过对鄱阳湖不同水位植被带的土壤细菌群落特征进行研究,发现中等水位梯度下的土壤具有更高的菌群丰度和多样性[8];张洪霞等通过对不同淹水条件下滨海芦苇湿地土壤微生物的研究,发现淹水条件下土壤古菌和细菌多样性较高[24];张琼琼等研究不同水位深度的植物根系区细菌多样性发现,植物根系区细菌多样性随水位加深而减少[25];刘亚军在其研究中表明细菌群落受淹水深度的影响不大[26]。本试验结果与顾诗云、张洪霞、郭太忠等的研究结果相似[24, 27-28],在本研究中3种不同水位条件下,香蒲不同生长期湿地底泥中的细菌丰度表现具有一致性:无水位<中水位<高水位。就细菌群落多样性而言,高水位条件下细菌多样性程度较高。造成该结果的原因有两点,一方面,水位条件的变化可直接改变底泥细菌群落的生存环境,水位条件的变化引起的底泥中其他环境因子的变化会导致氧化还原条件发生改变[29-30],在水位条件较高时,植物根系区底泥中处于微还原状态,部分砷酸盐(H3AsO4)转化为亚砷酸盐(H3AsO3),对底泥及植物危害相对较小,使得一部分砷敏感细菌得以存活,从而影响到底泥中细菌群落丰度和多样性的变化。另一方面,水位条件通过改变植物的生长环境间接影响底泥细菌群落,本研究中的试供植物为典型挺水植物香蒲,它具有根系生物量大及通气组织发达等特点,增加植物根在饱和机制中的输氧能力,促使植物根际形成好氧微生物的微氧环境[31-32],因而底泥细菌丰度及多样性在高水位条件下并未降低;另外,较高的水位条件能使得底泥微生物对基质的利用能力增加,植物的生长亦会向底泥中输入大量微生物可利用的碳源,充足的水分条件更利于微生物的生长[33]。本研究结果显示了微生物群落丰度与多样性对不同水位条件的响应关系基本一致,水位越高,其细菌群落丰度和多样性指数越大,这可以用于指示富砷湖滨湿地在不同水位条件及不同淹没期的生态环境变化,为湖滨湿地做出更好的环境响应提供依据。

  • 在不同水位条件下,门水平分类的优势细菌群落相对丰度具有一定的变化趋势。由图1可知,在本次模拟实验中,富砷湖滨湿地底泥中的五种优势群落分别为Proteobacteria(变形菌门)、Firmicutes(厚壁菌门)、Chloroflexi(绿弯菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)和Acidobacteria(酸杆菌门),这五类细菌约占总测序序列的68.70%—86.06%。其中,变形菌门为细菌群落门水平分类中的绝对优势菌门,生长期、枯落期变形菌门的相对丰度随淹水高度加大总体上呈现减少的趋势,繁盛期则表现为水位越高,相对丰度越小。很多研究表明,变形菌门在湖泊沉积物中具有较高比例[53],在砷污染土壤中也具有较强的耐受性,因而在砷污染底泥中依然是优势细菌群落,然而在变形菌门中存在大量好氧或兼性细菌,湖泊底泥长期处于高水位淹水状态,变形菌门的相对幅度在高水位条件下较小[34-35];绿弯菌门、厚壁菌门、酸杆菌门和拟杆菌门是门水平分类上除变形菌门在之外的优势菌群,这四大菌群对不同水位条件的响应呈现出多样性的特征。绿弯菌门相对丰度的最大值均出现中水位条件,这是由于绿弯菌门是兼性厌氧菌,依靠光能进行光合作用,同时在无氧条件下也能进行无氧呼吸[36],中水位梯度下的环境更加适合绿弯菌门的生长;除繁盛期外,厚壁菌的门相对丰度在无水位条件均显著低于高水位,分析原因,或是因为这一微生物群落为无毒的单细胞生物,生活在水中或水分充足、养分少的环境中[37],然而生长旺盛期,由于长期处于中、高水位的淹水状态下,植物分泌物数量增加,促使根系区底泥营养物质增多[38-39],不利于厚壁菌门的繁殖;在生长期和枯落期,酸杆菌门相对丰度最大值均出现在无水位条件,通常,在淹水状态下,特别是随水位的增加,氧气进入土壤的能力下降,不利于好氧微生物的生存和它们的代谢[40],而酸杆菌门属于好氧菌,因而在无水位条件下具有较高的相对丰度,这与Zeglin等的研究结果相似[41];拟杆菌门相对丰度在生长期不同水位条件下并无显著变化,但在其繁盛期和衰落期则表现为无水位条件下相对丰度减少,中水位条件下相对丰度增加,这可能是因为拟杆菌门为厌氧菌,更倾向于生活在水位较高的状态[42]。其他相对丰度较低的细菌群落在不同水位条件下的变化不大。

    另外,在变形菌门的纲水平下,包含了Gammaproteobacteria(γ-变形菌纲)、Deltaproteobacteria(δ-变形菌纲)和Alphaproteobacteria(α-变形菌纲)3个亚类,具有丰富的代谢多样性,对于C、N、P等营养元素的循环以及其他污染物的降解具有重要作用[43]。其中, Gammaproteobacteria(γ-变形菌纲)为优势菌纲,相对丰度最高,γ-变形菌纲以硫酸盐为电子受体降解有机物,具有耐砷性[44, 5],其在不同水位条件下的变化趋势同变形菌门完全一致,这是因为同种门属的菌群特性具有相似性,但在属水平上细菌群落的结构及多样性仍需更进一步探究。不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥细菌群落结构存在显著差异,这说明底泥细菌具有通过调整自身群落结构以适应环境条件变化的生存机制。

    图2为不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中属分类水平上的细菌群落组成,将细菌群落中平均丰度低于2%的部分合并在图中显示(≤2%);属水平分类中属于分类学数据库分类学谱系的中间等级,没有科学名称,以norank作为标记;uncultured表示属水平分类中未分离培养的细菌群落;unclassified属水平分类中在置信度阈值下,与数据库比对不上的细菌群落。

    在不同水位条件下,富砷湖滨湿地底泥中的细菌群落在属水平上完整且相对丰度较高的两个菌群分别是:Steroidobacteraceae_uncultured(固醇杆菌科下的一个未培养属)和Bacteroidetes vadinHA17_norankSteroidobacteraceae_uncultured总体上无显著差异,但其在枯落期变化相对显著,随水位降低呈现减小趋势,且相对丰度最小值(3.08%)出现在高水位条件下;Bacteroidetes vadinHA17_norank总体上呈现随淹水高度的加大而显著增加的趋势,总体变化趋势一致,其相对丰度最大值出现在高水位条件,这表明水位条件对属水平上细菌优势群落具有一定的影响。

  • 图3为不同水位条件下微生物群落在不同分类水平下的LEFSe分值柱状图,仅得分大于2.0的物种被展示。结果表明,微生物群落在不同分类水平上共有21个物种表现出了显著性的组间差异,无水位条件富集到的具有显著影响效应的目水平物种为Thalassobaculales,中水位条件富集到的具有显著影响效应的目水平物种为Flavobacteriales,科水平物种为Flavobacteriaceae,高水位条件富集到的具有显著影响效应的属水平物种为Clostridium_sensu_stricto_13Sporacetigenium,这表明微生物群落组成在不同分类水平上对水位变化具有不同的响应特征,也说明了不同水位条件下微生物群落组成的显著变化与特定物种的消长具有明显的相关性[45]。就门水平而言,以上21个物种分别隶属于Proteobacteria、Bacteroidetes、Firmicutes、Actinobacteria、Cyanobacteria、Cyanobacteria等。

    图4为不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥细菌门水平分类上群落结构与污染指标的冗余分析(RDA)结果排序图。根据RDA结果排序图中物种箭头和环境箭头之间的夹角判定相关性,呈钝角,为负相关,呈锐角,则为正相关,根据物种到环境因子的垂直距离越小,相关性越强。由图4可知,不同水位条件下,富砷湖滨湿地底泥污染指标与细菌群落之间的相关性存在差异性,底泥污染指标对细菌群落结构的影响程度不同。在无水位条件下(轴1和轴2共解释了68.4%的变量),TN和NO3-N含量对细菌群落结构的影响程度较强,与变形菌门、酸杆菌门相对丰度呈正相关,与绿弯菌、拟杆菌相对丰度呈负相关;在中水位条件下(轴1和轴2共解释了90.1%的变量),TN、TP、SOC、NO3-N、NH+4-N含量对细菌群落结构的影响程度较强,其中,SOC与厚壁菌门相对丰度呈正相关,与绿弯菌、酸杆菌相对丰度呈负相关,NH+4-N则与之相反,TP、NO3-N与变形菌门相对丰度呈正相关。

    在高水位条件下(轴1和轴2共解释了77.2%的变量),TP、TAs、SOC、NO3-N、NH+4-N含量对细菌群落结构的影响较大,其中,TAs、SOC、NO3-N与变形菌门、酸杆菌门呈正相关,与绿弯菌门、拟杆菌门呈负相关,TN与绿弯菌呈负相关,NH+4-N则与Synergistetes(互养菌门)呈正相关。这说明在不同水位条件下,不同的细菌群落对底泥污染元素的敏感程度存在差异。总体而言,TN、TP、SOC以及NO3-N、NH+4-N含量对不同水位条件下细菌群落结构具有显著影响。

    本模拟实验的研究结果中,富砷湿地底泥在门水平分类上的5种优势细菌群落分别是Proteobacteria(变形菌门)、Firmicutes(厚壁菌门)、Chloroflexi(绿弯菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)和Acidobacteria(酸杆菌门),这些优势菌门中包含了变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门等关键差异微生物,LDA分析结果显示关键差异微生物在不同水位条件下具有差异性。其中,变形菌门、厚壁菌门包含了大多数好氧反硝化菌,适宜在水位较低的底泥环境中生存[46, 28, 30],所以这些菌群在无水位条件和中水位条件下的相对丰度较高,绿弯菌门的相对丰度在中水位条件下最高,可见,淹水程度的变化能够显著影响湿地底泥中优势菌群的结构分布。RDA分析也显示变形菌门与底泥SOC、NO3-N含量呈正相关,与底泥TN含量呈负相关,且水位越高,相关性越强,这与变形菌自身利用SOC及其为底泥提供固氮能力的特性相符合[30],这与王鹏等的研究结果一致[8]。绿弯菌门在砷污染底泥中占有较高的比重[47],与TN、NH+4-N含量呈正相关,与NO3-N含量呈负相关,且在中水位条件下相关性最强,这是由于绿弯菌为光能自养菌,能够发酵代谢多种碳源,也具有反硝化功能[48],更倾向于在营养充足的环境中生存[49]。3种水位条件下SOC、NO3-N与厚壁菌门相对丰度呈正相关,与酸杆菌门呈负相关,这是由于厚壁菌门相对丰度与底泥营养程度相关,有研究表明,厚壁菌门受到砷污染的抑制[37],然而在水分充足的环境下具有较高的营养程度,且其适应性和繁殖能力较强[50],故厚壁菌门在中水位条件和高水位条件的相对丰度大于无水位条件,而酸杆菌门大多为嗜酸菌,可降解纤维素、半纤维素、木聚糖、果胶和几丁质等复杂有机物[51, 44],Zeglin等研究[41]河流沉积物在不同水位梯度下的细菌群落发现,酸杆菌在较干旱的地区相对丰度较高,本研究结果与其相似,这或与SOC含量相关,土壤水分通过影响微生物活性和底物的可利用性等方面影响SOC分解,进而造成微生物对SOC的分配利用策略不同[52]。不同水位条件下底泥污染物质是影响细菌群落结构的重要因素,可以对富砷湖滨湿地的生态修复提供有效的生物依据。

  • 本论文研究了不同水位条件下富砷湖滨湿地底泥中细菌群落结构及多样性的变化特征,得出了以下结论:

    (1)富砷湖滨湿地底泥中的细菌群落丰度变化具有一致性:无水位<中水位<高水位。就细菌群落多样性而言,高水位条件下细菌多样性程度较高。

    (2)在细菌群落结构中,门水平分类上的5种优势菌门为变形菌门、厚壁菌门、绿弯菌门、拟杆菌门和酸杆菌门,各优势菌门对不同水位条件的响应表现出多样性的特征。变形菌门纲水平分类上的优势细菌为γ-变形菌纲、δ-变形菌纲和α-变形菌纲3个亚类,γ-变形菌纲相对丰度最高,其在不同水位条件下的变化趋势与变形菌门一致。属水平分类上,相对丰度占比最大的为固醇杆菌科的部分属水平未培养细菌,隶属于变形菌门,且与变形菌门在不同水位条件下的变化特征一致。

    (3)TN、TP、SOC以及NO3-N、NH+4-N含量对底泥中细菌群落的影响显著,其中,TN、SOC、NO3-N、NH+4-N对细菌优势群落影响最为显著且呈现出多样性的特征。

    本文通过模拟实验研究,明晰了不同水位条件对于富砷湖滨湿地底泥中微生物群落结构及多样性具有显著影响,这可以用于指示砷污染湖滨湿地在不同水位条件下的生态环境变化,从而为湿地环境的改善和治理提供科学依据。但是对于水位引起的富砷湖滨湿地底泥中砷形态转化及其与微生物的作用关系并未进行探讨,需进一步详细研究。

参考文献 (53)

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