Loading [MathJax]/jax/output/HTML-CSS/fonts/TeX/fontdata.js

缺氧及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数

姬倩, 彭党聪, 赵文钊. 缺氧及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数[J]. 环境工程学报, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008
引用本文: 姬倩, 彭党聪, 赵文钊. 缺氧及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数[J]. 环境工程学报, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008
JI Qian, PENG Dangcong, ZHAO Wenzhao. Determination of decay coefficients of Anammox bacteria under anoxic and anaerobic conditions[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008
Citation: JI Qian, PENG Dangcong, ZHAO Wenzhao. Determination of decay coefficients of Anammox bacteria under anoxic and anaerobic conditions[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008

缺氧及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数

    作者简介: 姬倩(1994—),女,硕士研究生。研究方向:污水处理理论与技术。E-mail:jiqian@xauat.edu.cn
    通讯作者: 彭党聪(1957—),男,硕士,教授。研究方向:污水处理理论与技术。E-mail:dcpeng@xauat.edu.cn
  • 基金项目:
    陕西省住房城乡科技开发项目(2015-K65)
  • 中图分类号: X703.1

Determination of decay coefficients of Anammox bacteria under anoxic and anaerobic conditions

    Corresponding author: PENG Dangcong, dcpeng@xauat.edu.cn
  • 摘要: 衰减系数是表征微生物增长的重要动力学参数,与所处环境密切相关。采用基质利用速率测定方法,以厌氧氨氧化工艺中最常见的厌氧氨氧化菌(Candidatus Brocadia)为对象,探讨了其在缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境下的衰减系数。结果表明:基质利用速率测定方法可有效避免由于其他细菌的衰减而引起的实验误差;缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数依次为0.035 2 d−1、0.025 7 d−1和0.051 2 d−1,相比于其他自养菌,厌氧氨氧化菌的衰减系数较小。在进行污泥保存时,维持NO3-N的缺氧环境有利于厌氧氨氧化菌活性和数量的保存。
  • 随着城镇化水平的不断提高,地表水体的污染负荷日益加重[1]。人工湿地作为污水处理技术之一[2],利用填料的吸附作用、微生物降解作用和植物吸收等作用去除水中的污染物。人工湿地进行磷的去除主要以填料吸附作用为主[3]。目前,人工湿地中常用的填料主要有砾石[4]、沸石[5]、石灰石[6]、钢渣[7]、粉煤灰砖[8-9]、陶粒[10]等。并且,填料的吸附作用除了与填料本身材质有关,还受到理化性质、吸附时间和pH的影响。因此,选择人工湿地的填料是至关重要的。

    本研究结合西北地区地域气候特征,就地取材,以生物炭、混凝土渣为主要研究对象,从吸附动力学和热力学的角度研究了其对PO34-P的吸附特性。基于以上研究结果,构建了2种类型的潜流人工湿地,加入生活污水,考察了其对生活污水中磷的去除效果,并探究了填料对磷的吸附机理及其稳定性,为西北地区人工湿地选材及人工湿地的构建提供参考。

    以废弃混凝土渣和生物炭为实验填料,将一部分进行研磨过筛,选择20~60目的填料,清洗烘干后备用。混凝土渣取自本地区某建筑工地。生物炭购买于本地区活性炭厂,该生物炭由农业秸秆经风干、破碎及炭化处理制备而成。2种材料物理化学特性[10-15]表1

    表 1  填料的物理化学性质
    Table 1.  Physical and chemical properties of filler
    填料密度/(g·cm−3)孔隙率/%渗透系数/(cm·s−1)比表面积/(m2·g−1)Al含量/%Fe含量/%Ca含量/%Mg含量/%
    混凝土渣1.04057.1500.2766.7706.06010.13068.5200.910
    生物炭0.549~0.58050.000.07664.300~504.3000.16~1.720.36~7.160.67~8.240.27~8.96
     | Show Table
    DownLoad: CSV

    在进行动力学实验时,各称取0.500 g填料于150 mL锥形瓶中,加入50 mg·L−1的磷酸二氢钾(KH2PO4)溶液50 mL,置于(25±1) ℃、转速为150 r·min−1的恒温振荡器中连续振荡,分别在0.17、0.33、0.5、1.0、1.5、3、5、10、18、24 h取出,取上清液过0.45 μm滤膜,测其PO34-P含量。

    在进行热力学实验时,各称取0.500 g填料于150 mL锥形瓶中,加入磷浓度为1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、20.0、40.0、60.0 mg·L−1的KH2PO4溶液50 mL,置于(25±1) ℃、转速为150 r·min−1的恒温振荡器中振荡,由所得的平衡时间,取上清液过0.45 μm滤膜,测其磷含量。在15 ℃和35 ℃下使用同样的方法进行实验。

    PO34-P的测定采用钼酸铵分光光度法,具体操作步骤参见文献中的方法[16]

    采用10 mm厚的有机玻璃,构建2种长宽高为100 cm×60 cm×50 cm的静态潜流人工湿地,其可处理污水容积为20 L。在垂直方向,湿地自下到上由厚度为5 cm的下垫层、30 cm填料层(下部为20 cm粗填料层,上部为10 cm细填料层)和10 cm土壤层构成,如图1所示。下垫层由粒径为15~25 mm的鹅卵石构成,粗填料层和细填料层分别由粒径为6~10 mm和3~5 mm的填料铺设而成,土壤层为过10目筛的均匀黄土。在水平方向,共设置5个长宽高为60 cm×20 cm×50 cm的隔室,进水来自居民生活污水,由湿地进水池均匀投配,经填料层到达湿地出水池后由收集管排出。水中pH为7.2~7.8,溶解氧为3.4~3.8 mg·L−1PO34-P浓度为3.8~5.9 mg·L−1

    图 1  潜流人工湿地
    Figure 1.  Subsurface flow constructed wetland

    构建人工湿地,进行驯化培养,待运行稳定后,采用间隔配水方式。由图1可知,湿地有效表面积为0.6 m2,有效过流体积为0.02 m3,实测平均水力停留时间为24 h,计算获得有效水力负荷为0.034 m3·(m2·d)−1[17]。实验总计重复3次,控制水温为10~12 ℃,分别在6、12、24、36、48、60、72、84、96、108、120 h追踪测定出水磷含量,分析其运行参数和稳定性。

    填料对磷的动力学吸附过程一般用准一级、准二级动力学模型、颗粒内扩散模型和Elovich模型进行拟合分析,如式(1)~式(4)所示。

    lnCt=ak1t (1)
    lnQ=a+k2lnt (2)
    Q=k3t+a (3)
    Q=a+k4lnt (4)

    式中:Ctt时刻吸附溶液中PO34-P平衡质量浓度,mg·L−1Qtt时刻基质对PO34-P的吸附量,mg·g−1a为动力学常数,mg·L−1k1为准一级动力学模型速率常数,mg·(L·h)−1k2为准二级动力学模型速率常数,mg·(g·h)−1k3为颗粒内扩散模型速率常数,mg·(g·h)−1k4为Elovich模型速率常数,mg·(g·h)−1t为反应时间,h。

    填料对磷的等温吸附过程一般用Langmuir和Freundlich等温曲线经验方程来描述,如式(5)和式(6)所示。

    1Q=1QmKLCf+1Qm (5)
    lgQ=lgKF+1nlgCf (6)

    式中:Q为基质对PO34-P的吸附量,mg·g−1Qm为基质对PO34-P的饱和吸附量,mg·g−1Cf为吸附平衡后滤液中PO34-P浓度,mg·L−1KL为Langmuir吸附特征常数,mg·L−1KF为Freundlich特征常数,mg·g−1n为Freundlich特征常数,g·L−1

    研究结果均采用OriginPro8.0及Excel 2019软件进行数据显著性分析。

    基于浓度为30 mg·L−1的KH2PO4的进水条件,实验设3个平行样,2种填料对PO34-P的吸附动力学实验结果如图2所示。混凝土渣和生物炭基质对磷的吸附量随着时间的延长而不断增加,在吸附时间为18 h时,2种填料均达到吸附的最大值,可以认为此时吸附达到平衡。这与张修稳等[12]在填料对磷的吸附特性比较中的研究结果相似。整体来看,混凝土渣的最大吸附量为2.206 mg·g−1,是生物炭最大吸附量的2.16倍。分析其原因为,填料除磷不仅和物理吸附有关,还与金属元素Al、Ca、Mg、Fe有关[18-19]。由表1可知,混凝土渣钙含量高达68.52%,这是因为混凝土渣在制作过程中需要加入大量的石灰石,使其具有丰富的氧化钙,而Ca元素容易磷酸根离子发生化学反应,形成钙结合态磷酸盐(Ca-P)沉淀,从而降低水中的磷含量[20],所以混凝土渣对磷的吸附量高于生物炭。由表1可知,生物炭虽然含有金属元素较少,但是其具有较高的比表面积,使其有利于物理吸附,以去除水中的磷。

    图 2  填料对PO34-P的吸附动力学曲线
    Figure 2.  Adsorption kinetics of PO34-P on the fillers

    用准一级动力学方程、准二级动力学方程、颗粒内扩散力学方程和EIovich方程对磷的吸附动力学进行拟合,结果如表2所示。2种填料在动力学吸附过程中EIovich方程模拟拟合效果最佳,这说明在混凝土渣和生物炭对PO34-P的吸附过程中,主要包含了表面吸附、颗粒内部扩散和外部液膜扩散等多种吸附过程[9]。在EIovich方程中,K4是吸附速率随时间变化快慢的指标,其值越大,表示吸附速率下降越快。由表2可知,混凝土渣的吸附速率随时间下降的比生物炭缓慢,即混凝土渣对生活污水中磷具有更好的持续效应。

    表 2  填料对PO34-P的吸附动力学方程参数
    Table 2.  Fitting parameters of PO34-P adsorption kinetics equation on the fillers
    填料准一级动力学方程准二级动力学方程颗粒内扩散动力学方程Elovich方程
    a/(mg·L−1)K1/(mg·(L·h)−1)R2 a/(mg·L−1)K2/(mg(g·h)−1)R2 a/(mg·L−1)K3/(mg·(g·h)−1)R2 a/(mg·L−1)K4/(mg·(g·h)−1)R2
    混凝土渣2.2730.0120.5600.5990.0840.6141.9430.0670.6521.9720.090.759
    生物炭1.3230.0400.707−0.2510.1040.7920.7400.07040.6850.7830.8880.846
     | Show Table
    DownLoad: CSV

    基于不同磷酸盐浓度,填料对PO34-P等温吸附实验结果见图3。由图3可知,随着温度的升高,在不同磷酸盐初始浓度胁迫下,吸附量整体呈上升趋势。这表明温度的升高对基质吸附有促进作用,同时,也表明混凝土渣和生物炭的吸附过程是吸热过程。混凝土渣和生物炭的吸附变化均呈现2个阶段:在第1阶段,2种填料均呈现急速上升的趋势,随着磷酸盐浓度的增加,吸附量开始快速增加;第2阶段中,当磷酸盐浓度达到40 mg·L−1时,2种基质的吸附量达到最大,吸附速率变得缓慢,且呈下降趋势。在磷酸盐浓度达到12 mg·L−1以上,混凝土渣较生物炭具有更好的吸附效应。这是由于混凝土渣具有较高的钙含量,使混凝土渣在磷的吸附过程中既有物理吸附过程,又伴有化学吸附过程。崔理华等[21]在人工湿地填料对磷的吸附特性研究中也证实了这一点,即含钙量多的填料,易与水中的磷生成难溶性盐,从而去除水中的磷。

    图 3  填料对PO34-P等温吸附曲线
    Figure 3.  Isothermal adsorption curves of PO34-P by the fillers

    用Langmuir和Freundlich方程拟合混凝土渣和生物炭基质对磷的等温吸附效应,获得拟合值,结果如表3所示。通过比较2种等温方程的相关系数R2,发现混凝土渣对磷的吸附更符合Freundlich方程。这说明混凝土渣对磷的吸附既有单层吸附,又有多层吸附,且表面是非均匀的。另外,其非线性指数n大于1,表明混凝土渣的吸附容易进行,且为不可逆过程[22]。这进一步解释了混凝土渣对于磷吸附伴有化学吸附特征。对生物炭来说,Langmuir方程拟合效果更好,这说明生物炭对磷的吸附多为单分子层吸附。其中,KL·Qm的大小反映了固液体系中填料吸附溶质的缓冲能力的强弱[23],其值越大,表示缓冲能力越强。由表3可知,混凝土渣在磷的去除效应中具有更好的稳定性。

    表 3  填料对PO34-P的等温吸附方程参数
    Table 3.  Fitting parameters of PO34-P isothermal adsorption equation by the fillers
    填料温度/℃Langmuir等温吸附模型Freundlich等温吸附模型
    Qm/(mg·g−1)KL/(mg·L−1)KL·Qm/(mg2·(g·L)−1)R2 n/(g·L−1)KF/(mg·g−1)R2
    生物炭151.9030.0940.1790.8632.4030.3130.706
    252.8070.0550.1540.9361.9550.2820.849
    354.4340.0310.1370.9551.6250.2450.906
    混凝土渣152.7821.1163.1040.8293.8431.5520.822
    252.9290.8852.5930.8783.2432.2900..891
    352.3212.1705.0360.9084.7941.0100.957
     | Show Table
    DownLoad: CSV

    本研究构建了2种长、宽、高为100 cm×60 cm×50 cm的静态潜流人工湿地模型,以进行生活污水处理研究,其结构如图1所示。本研究首先对所建人工湿地进行驯化处理,待湿地模型运行稳定之后,然后探究HRT对PO34-P的去除效果。结合西北地区气候特征,湿地进水水温为10~12 ℃左右、pH为7.2~7.8、溶解氧为3.4~3.8 mg·L−1、水力负荷为0.034 m3·(m2·d)−1、初始加入生活污水PO34-P浓度为3.8~5.9 mg·L−1。对3次重复实验所得去除率取平均值,进而绘制潜流人工湿地对PO34-P的去除率随HRT的变化曲线。如图4所示,随着HRT的延长,湿地对PO34-P的去除率迅速提高,并始终保持呈正相关性,当HRT达到24 h时,潜流人工湿地中的磷的去除效率增加幅度开始减慢。此时,混凝土渣湿地和生物炭湿地对磷的平均去除率分别为94.86%和86.37%。当HRT≥24 h时,湿地中填料对磷吸附速率趋于稳定。此时,由于水中溶解氧源于进水,溶解氧被消耗减少,聚磷菌活性降低,对磷的积累能力降低,反应速率变慢,使填料对污染物的吸附趋于平衡。综上所述,本研究选择24 h为最佳HRT,综合考虑2种人工湿地的除磷效果和经济成本等因素,认为宜选择混凝土渣为填料的人工湿地来处理西北地区生活污水中的磷。

    图 4  不同停留时间潜流人工湿地PO34-P净化效果
    Figure 4.  PO34-P purification effect by the subsurface flow constructed wetland under different hydraulic retention times

    1)混凝土渣和生物炭对磷的静态吸附平衡时间均为18 h,且混凝土渣的最大吸附量是生物炭最大吸附量的2.16倍。动力学吸附过程拟合结果表明,EIovich模拟方程对2种填料的拟合效果最佳,这表明2种填料对PO34-P的吸附有表面吸附、颗粒内部扩散和外部液膜扩散等多种吸附过程。混凝土渣的等温吸附特性与Freundlich方程拟合更好,生物炭更符合Langmuir方程,这表明混凝土渣对PO34-P吸附既有单层吸附,又有多层吸附,表面是非均匀的,而生物炭对PO34-P的吸附多为单层吸附。

    2)动力学吸附实验和等温吸附实验结果表明,混凝土渣对PO34-P的吸附既有物理吸附亦有化学吸附。

    3)与以生物炭为填料的湿地相比较,以混凝土渣为填料的静态潜流人工湿地除去污水中的磷效果更好。在HRT为24 h时,混凝土渣湿地和生物炭湿地对PO34-P的去除率分别达到了94.86%和86.37%。

    4)选用混凝土渣作为潜流人工湿地填料,能更好地达到有效处理西北地区农村生活污水中磷的目的。

  • 图 1  基质利用速率测定实验装置图

    Figure 1.  Schematic diagram of substrate utilization rate determination

    图 2  厌氧氨氧化污泥FISH图像

    Figure 2.  FISH images of anammox sludge

    图 3  初始基质利用速率测定过程中NH+4-N、NO2-N和NO3-N浓度随时间的变化

    Figure 3.  Variations of NH+4-N, NO2-N and NO3-N concentrations during the initial substrate utilization rate determination process

    图 4  不同衰减环境下厌氧氨氧化污泥基质利用速率随时间的变化

    Figure 4.  Variations of substrate utilization rate determination of anammox sludge under different decay environment conditions

    图 5  不同衰减环境下−ln(Rt/R0)与衰减时间的变化关系

    Figure 5.  Relationship between −ln(Rt/R0) and time under different decay environment conditions

    表 1  荧光原位杂交检测细菌所用探针

    Table 1.  FISH probes of bacteria detection

    探针名称RNA序列(5'~3')标记细菌种群
    Eub338GCT GCC TCC CGT AGG AGT总菌
    Eub338ⅡGCA GCC ACC CGT AGG TGT总菌
    Eub338ⅢGCT GCC ACC CGT AGG TGT总菌
    Amx368CCT TTC GGG CAT TGC GAA所有厌氧氨氧化菌
    探针名称RNA序列(5'~3')标记细菌种群
    Eub338GCT GCC TCC CGT AGG AGT总菌
    Eub338ⅡGCA GCC ACC CGT AGG TGT总菌
    Eub338ⅢGCT GCC ACC CGT AGG TGT总菌
    Amx368CCT TTC GGG CAT TGC GAA所有厌氧氨氧化菌
    下载: 导出CSV

    表 2  不同条件下厌氧氨氧化菌的衰减系数

    Table 2.  Decay coefficients of anammox bacteria under different environment conditions

    条件温度/℃衰减系数/d−1来源
    NO3-N350.004 8[17]
    5±20.044 3[18]
    15±20.033 0[19]
    30±20.063 0[18]
    350.017 3[20]
    200.013 5[20]
    40.012 3[20]
    −300.003 2[20]
    NH+4-N + NO2-N370.002 9~0.008 1[21]
    持续饥饿350.006 2[22]
    间歇饥饿350.011 0[22]
    条件温度/℃衰减系数/d−1来源
    NO3-N350.004 8[17]
    5±20.044 3[18]
    15±20.033 0[19]
    30±20.063 0[18]
    350.017 3[20]
    200.013 5[20]
    40.012 3[20]
    −300.003 2[20]
    NH+4-N + NO2-N370.002 9~0.008 1[21]
    持续饥饿350.006 2[22]
    间歇饥饿350.011 0[22]
    下载: 导出CSV

    表 3  异养菌和硝化菌在不同温度下的衰减系数

    Table 3.  Decay coefficients of heterotrophic bacteria and nitrifying bacteria under different temperatures

    菌种温度/℃衰减系数/d−1
    异养菌100.20
    200.40
    硝化菌100.05
    200.15
    菌种温度/℃衰减系数/d−1
    异养菌100.20
    200.40
    硝化菌100.05
    200.15
    下载: 导出CSV
  • [1] 彭永臻, 张向晖, 马斌, 等. 厌氧氨氧化菌群体感应机制[J]. 北京工业大学学报, 2018, 44(3): 449-454. doi: 10.11936/bjutxb2017040004
    [2] CHEN D Y, GU X S, ZHU W Y, et al. Denitrification- and anammox-dominant simultaneous nitrification, anammox and denitrification (SNAD) process in subsurface flow constructed wetlands[J]. Bioresource Technology, 2019, 271: 298-305.
    [3] ALI M, OSHIKI M, OKABE S. Simple, rapid and effective preservation and reactivation of anaerobic ammonium oxidizing bacterium " Candidatus Brocadia sinica”[J]. Water Research, 2014, 57: 215-222. doi: 10.1016/j.watres.2014.03.036
    [4] YANG W, HE S L, HAN M, et al. Nitrogen removal performance and microbial community structure in the start-up and substrate inhibition stages of an anammox reactor[J]. Journal of Bioscience & Bioengineering, 2018, 126(1): 88-95.
    [5] STARVDW R L, ABMA W R, BLOMMERS D, et al. Startup of reactors for anoxic ammonium oxidation: Experiences from the first full-scale anammox reactor in Rotterdam[J]. Water Research, 2007, 41(18): 4149-4163. doi: 10.1016/j.watres.2007.03.044
    [6] LACKNER S, GILBERT E M, VLAEMINCK S E, et al. Full-scale partial nitritation/anammox experiences: An application survey[J]. Water Research, 2014, 55: 292-303. doi: 10.1016/j.watres.2014.02.032
    [7] STROUS M, KUENEN G J, JETTEN M S M. Key physiology of anaerobic ammonium oxidation[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1999, 65(7): 3248-3250.
    [8] 李惠娟, 彭党聪, 陈国燕, 等. ANAMMOX的快速启动及EPS在ANAMMOX颗粒污泥中的空间分布[J]. 环境科学, 2017, 38(7): 2931-2940.
    [9] 陈国燕, 彭党聪, 李惠娟, 等. 厌氧氨氧化耦合部分反硝化处理低浓度氨氮废水[J]. 环境工程学报, 2018, 12(7): 1888-1895. doi: 10.12030/j.cjee.201712107
    [10] LOTTI T, KLEEREBEZEM R, LUBELLO C, et al. Physiological and kinetic characterization of a suspended cell anammox culture[J]. Water Research, 2014, 60: 1-14. doi: 10.1016/j.watres.2014.04.017
    [11] GRAAF V D A A, DE BRUIJN P D, ROBERTSON L A, et al. Autotrophic growth of anaerobic ammonium-oxidizing microorganisms in a fluidized bed reactor[J]. Microbiology, 1996, 142(8): 2187-2196. doi: 10.1099/13500872-142-8-2187
    [12] HE S L, CHEN Y, QIN M, et al. Effects of temperature on anammox performance and community structure[J]. Bioresource Technology, 2018, 260: 186-195. doi: 10.1016/j.biortech.2018.03.090
    [13] SUN S H, SONG Y, YANG X J, et al. Strategies for improving nitrogen removal under high sludge loading rate in an anammox membrane bioreactor operated at 25 °C[J]. Chemical Engineering Science, 2018, 183: 106-114. doi: 10.1016/j.ces.2018.03.011
    [14] 国家环境保护局. 水和废水监测分析方法[M]. 4版. 北京: 中国环境科学出版社, 2002.
    [15] 汪彩华, 郑平, 唐崇俭, 等. 间歇性饥饿对厌氧氨氧化菌混培物保藏特性的影响[J]. 环境科学学报, 2013, 33(1): 36-43. doi: 10.11654/jaes.2013.01.006
    [16] 汪彩华, 郑平, 蔡靖, 等. 厌氧氨氧化菌混培物保藏方法的研究[J]. 中国环境科学, 2013, 33(8): 1474-1482.
    [17] SCAGLIONE D, CAFFAZ S, BETTAZZI E, et al. Experimental determination of Anammox decay coefficient[J]. Journal of Chemical Technology & Biotechnology Biotechnology, 2009, 84(8): 1250-1254.
    [18] 李祥, 郑宇慧, 黄勇, 等. 保存温度及时间对厌氧氨氧化污泥活性的影响[J]. 中国环境科学, 2011, 31(1): 56-61.
    [19] 郑宇慧, 李祥, 黄勇. 保藏温度对厌氧氨氧化污泥活性的影响研究[J]. 环境污染与防治, 2011, 33(5): 82-86. doi: 10.3969/j.issn.1001-3865.2011.05.019
    [20] XING B S, GUO Q, JIANG X Y, et al. Influence of preservation temperature on the characteristics of anaerobic ammonium oxidation (anammox) granular sludge[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2016, 100(10): 4637-4649. doi: 10.1007/s00253-016-7292-3
    [21] OSHIKI M, AWATA T, KINDAICHI T, et al. Cultivation of planktonic anaerobic ammonium oxidation (anammox) bacteria using membrane bioreactor[J]. Microbes & Environments, 2013, 28(4): 436-443.
    [22] ZHANG Z Z, BUAYI X, CHENG Y F, et al. Anammox endogenous metabolism during long-term starvation: Impacts of intermittent and persistent modes and phosphates[J]. Separation & Purification Technology, 2015, 151: 309-317.
    [23] HENZE M, GUJER W, MINO T, et al. Activated Sludge Models ASM1, ASM2, ASM2D and ASM3[M]. London: IWA Publishing, 2000.
    [24] SALEM S, MOUSSA M S, LOOSDRECHT V M C M. Determination of the decay rate of nitrifying bacteria[J]. Biotechnology and Bioengineering, 2006, 94(2): 252-262. doi: 10.1002/(ISSN)1097-0290
  • 期刊类型引用(2)

    1. 蒙小俊,朱妮. 基于厌氧氨氧化菌特性的富集策略及培养过程分析. 工业水处理. 2022(08): 34-42 . 百度学术
    2. 李川皓,刘艳艳,金娉婷,赵红波,李会荣,王星凌,盛清凯. 外源益生菌对塑料袋发酵全株青绿玉米霉变的影响. 山东农业科学. 2020(06): 124-128 . 百度学术

    其他类型引用(0)

  • 加载中
图( 5) 表( 3)
计量
  • 文章访问数:  4468
  • HTML全文浏览数:  4468
  • PDF下载数:  75
  • 施引文献:  2
出版历程
  • 收稿日期:  2019-01-02
  • 录用日期:  2019-05-08
  • 刊出日期:  2019-12-01
姬倩, 彭党聪, 赵文钊. 缺氧及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数[J]. 环境工程学报, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008
引用本文: 姬倩, 彭党聪, 赵文钊. 缺氧及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数[J]. 环境工程学报, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008
JI Qian, PENG Dangcong, ZHAO Wenzhao. Determination of decay coefficients of Anammox bacteria under anoxic and anaerobic conditions[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008
Citation: JI Qian, PENG Dangcong, ZHAO Wenzhao. Determination of decay coefficients of Anammox bacteria under anoxic and anaerobic conditions[J]. Chinese Journal of Environmental Engineering, 2019, 13(12): 3012-3018. doi: 10.12030/j.cjee.201901008

缺氧及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数

    通讯作者: 彭党聪(1957—),男,硕士,教授。研究方向:污水处理理论与技术。E-mail:dcpeng@xauat.edu.cn
    作者简介: 姬倩(1994—),女,硕士研究生。研究方向:污水处理理论与技术。E-mail:jiqian@xauat.edu.cn
  • 1. 西安建筑科技大学环境与市政工程学院,西安 710055
  • 2. 西北水资源与环境生态教育部重点实验室,西安 710055
基金项目:
陕西省住房城乡科技开发项目(2015-K65)

摘要: 衰减系数是表征微生物增长的重要动力学参数,与所处环境密切相关。采用基质利用速率测定方法,以厌氧氨氧化工艺中最常见的厌氧氨氧化菌(Candidatus Brocadia)为对象,探讨了其在缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境下的衰减系数。结果表明:基质利用速率测定方法可有效避免由于其他细菌的衰减而引起的实验误差;缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数依次为0.035 2 d−1、0.025 7 d−1和0.051 2 d−1,相比于其他自养菌,厌氧氨氧化菌的衰减系数较小。在进行污泥保存时,维持NO3-N的缺氧环境有利于厌氧氨氧化菌活性和数量的保存。

English Abstract

  • 厌氧氨氧化是指在厌氧条件下,厌氧氨氧化菌利用NO2-N将NH+4-N氧化,最终生成N2和少量NO3-N的过程[1-2]。与传统硝化反硝化工艺相比,厌氧氨氧化工艺不消耗有机物,污泥产率低,尤其适合于处理高氨氮、低C/N的废水[3-4],因此,其已受到了国内外广泛关注。2006年,荷兰鹿特丹污水处理厂以厌氧氨氧化工艺进行污泥压滤液的脱氮处理,反应器总氮负荷高达9.5 kg·(m3·d)−1,远高于传统脱氮工艺的去除效率[5]。目前,全球范围内已有超过100座以厌氧氨氧化工艺运行的污水处理装置[6]

    尽管厌氧氨氧化工艺具有高效脱氮、运行成本低等优势,然而,由于厌氧氨氧化菌的细胞产率低[7],如何在较短时间内获得足够的厌氧氨氧化菌成为厌氧氨氧化工艺启动和运行的关键所在。微生物的增长是同化和衰减共同作用的结果,而表征微生物衰减的参数为衰减系数。因此,研究衰减系数对探讨厌氧氨氧化微生物的增殖和培养具有重要意义。目前,有关厌氧氨氧化菌衰减系数的研究大多为厌氧条件,而缺氧条件下的较少,探究不同环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数,可为厌氧氨氧化工艺的广泛应用提供理论依据和技术指导。

    本研究以实验室稳定运行6年的SBR中的厌氧氨氧化菌(Candidatus Brocadia)为研究对象,在温度为35 ℃且无电子供体的条件下,分别进行缺氧(NO2-N、NO3-N)和厌氧环境的衰减培养,通过测定厌氧氨氧化污泥的基质利用速率,从而确定了不同环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数。

  • 衰减培养的污泥取自以SBR方式稳定运行的厌氧氨氧化反应器[8-9]。该污泥的总氮负荷为1.59 kg·(m3·d)−1、总氮去除率为90.64%、ΔNO2-N/ΔNH+4-N为1.33、ΔNO3-N/ΔNH+4-N为0.26,其参数比LOTTI等[10]报道的理论值偏大。该污泥颗粒化程度较好,呈红棕色。

    实验用水采用无氧去离子水配制。缺氧环境下衰减系数测定的培养液中分别投加30 mg·L−1 NaNO2和25 mg·L−1 NaNO3,厌氧环境下衰减系数测定的培养液中无NaNO2和NaNO3。基质利用速率测定过程中同时投加25 mg·L−1 NH4Cl和33 mg·L−1 NaNO2。两者均投加500 mg·L−1 KHCO3、180 mg·L−1 CaCl2·2H2O、100 mg·L−1 MgSO4·7H2O、50 mg·L−1 KH2PO4、微量元素Ⅰ和Ⅱ[11-13]均为1 mL·L−1

  • 1) 衰减培养。从反应器中各取150 mL颗粒污泥混合液,采用细胞破碎仪将污泥破碎,使污泥呈现悬浮状态,然后经无氧去离子水淘洗后,置于3个500 mL的培养瓶中,缺氧环境分别投加30 mg·L−1 NaNO2和25 mg·L−1 NaNO3,厌氧环境无NaNO2和NaNO3,3个培养瓶中均投加微量元素后用无氧去离子水定容至400 mL,用橡胶塞塞紧后,向瓶内通入高纯氮气,以去除水中溶解氧,密封后,置于35 ℃恒温水浴中进行衰减培养。

    2) 基质利用速率测定。厌氧氨氧化污泥的基质利用速率测定装置见图1,具体操作步骤:从培养瓶中取一定体积的厌氧氨氧化污泥,用无氧去离子水淘洗后,置于250 mL广口瓶中,同时加入25 mg·L−1 NH4Cl、33 mg·L−1 NaNO2和微量元素,然后用无氧去离子水定容至200 mL,采用高纯氮气进行曝气,以去除水中溶解氧。通过恒温水浴控制温度在35 ℃,KHCO3作为缓冲液,将pH控制为7.3~7.8,每隔15 min取样,分析测定样品中NH+4-N和NO2-N的浓度,由t-c曲线确定厌氧氨氧化污泥的基质利用速率。

  • 衰减系数的定义:在无外加基质的条件下,单位质量的微生物在单位时间内减少的细胞量,计算方法如式(1)所示。

    式中:b为衰减系数;边界条件为t=0时,X=X0。对式(1)进行积分得到式(2)。

    基质利用速率的定义:在基质充足的条件下,单位体积(反应器)微生物在单位时间内利用基质的量,计算方法如式(3)所示。

    t=0时,对应的污泥浓度X=X0,对应的基质利用速率R=R0,将其代入式(3),得到式(4)。

    t=t时,对应的污泥浓度X=Xt,对应的基质利用速率R=Rt,将其代入式(3),得到式(5)。

    将式(5)与式(4)合并,并将式(2)代入,得到式(6)。

    式中:X0为初始时刻的污泥浓度,g·L−1Xtt时刻的污泥浓度,g·L−1R0为初始时刻的基质利用速率,mg·(L·d)−1Rtt时刻的基质利用速率,mg·(L·d)−1qmax为单位生物量的最大基质利用速率,d−1b为微生物的衰减系数,d−1

    依据式(6),通过测定厌氧氨氧化污泥基质利用速率随时间的变化,即可确定厌氧氨氧化菌的衰减系数。

  • 1)常规水质指标分析。实验中各项常规水质指标均按文献中的方法[14]进行测定:NH+4-N采用纳氏试剂分光光度法;NO2-N采用N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法;NO3-N采用紫外分光光度法;MLSS和MLVSS均采用重量法;pH采用雷磁PHS-3C型pH计进行测定。

    2)荧光原位杂交(FISH)。厌氧氨氧化污泥中的微生物种群采用荧光原位杂交法(FISH)进行分析。颗粒污泥经冷冻切片机(Leica CM 1950)进行切片,固定在正电荷黏附玻片上,杂交后,用激光共聚焦显微镜(TCS SP8,莱卡)进行观察和图像采集。实验所用探针如表1所示,总细菌采用Eub338mix(Eub338,Eub338Ⅱ和Eub338Ⅲ等体积混合),厌氧氨氧化菌采用Amx368。厌氧氨氧化菌的定量分析是将污泥样品用细胞破碎仪破碎,杂交后,在激光共聚焦显微镜下观察,并随机采集50幅图像,经Image-Pro Plus软件进行分析后,统计目标微生物占总生物数量的比例。

  • 采用荧光原位杂交对实验所用污泥中的微生物菌群进行分析,结果表明,厌氧氨氧化菌为优势菌(图2),采用Image-Pro Plus软件进行图像分析,确定污泥中厌氧氨氧化菌的含量占总细菌含量的86.03%,因此,采用该污泥进行厌氧氨氧化菌衰减系数的实验测定是可行的。

  • 图3为实验所用污泥NH+4-N、NO2-N利用速率及NO3-N产生速率的测定结果。如图3所示,NH+4-N、NO2-N和NO3-N的浓度随时间变化的线性关系均较好。依据图3的数据,可得厌氧氨氧化污泥的NH+4-N利用速率为155.66 mg·(L·d)−1。反应结束时,测得污泥的MLVSS为1.028 g·L−1,对应的以MLVSS计量的NH+4-N利用速率为151.49 mg·(g·d)−1。然后,以此作为缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境下衰减培养的厌氧氨氧化污泥的初始基质利用速率(R0)。

  • 将厌氧氨氧化污泥分别置于缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境进行衰减培养,每隔5 d对其进行基质利用速率测定,相应的厌氧氨氧化污泥基质利用速率(Rt)随时间的变化趋势见图4

    图4(a)为缺氧(NO2-N)环境下Rt随时间的变化。由图4(a)可见,经过40 d的衰减培养后,RtNH+4-N利用速率为32.69 mg·(L·d)−1,仅为初始值的21%。由FISH检测结果及反应化学计量比可知,系统中可能存在少量反硝化菌,而反硝化菌会利用NO2-N产生NH+4-N,为厌氧氨氧化菌提供了基质,导致厌氧氨氧化污泥基质利用速率在衰减培养初期下降较快,随后呈线性下降的趋势。

    图4(b)为缺氧(NO3-N)环境下Rt随时间的变化。由图4(b)可见,相比于NO2-N衰减环境,NO3-N环境下厌氧氨氧化污泥基质利用速率较大,即相应的衰减较小。经过40 d的衰减培养,RtNH+4-N利用速率为48.82 mg·(L·d)−1,为初始值的31.36%。系统中存在的反硝化菌也会利用NO3-N产生NH+4-N,导致衰减培养初期厌氧氨氧化污泥的基质利用速率下降较快,之后呈线性下降的趋势。

    图4(c)为厌氧环境下Rt随时间的变化。由图4(c)可见,经过40 d的衰减培养,RtNH+4-N利用速率为19.58 mg·(L·d)−1,基质利用速率大幅减小,仅为初始值的12.58%。在实验过程中,部分污泥颜色变黑,这是因为厌氧氨氧化菌因富含血红素而呈现红色,而汪彩华等[15]的研究结果表明,在无基质的环境下,血红素含量会逐渐减少;另外,死亡菌体水解后会产生硫化物,且硫化物含量随着时间的延长会增多[16],而大部分金属硫化物是黑色沉淀物,最终导致厌氧氨氧化污泥外观颜色呈现黑色。但是,厌氧氨氧化污泥的基质利用速率随时间变化的线性关系良好,这说明厌氧环境下产生的硫化物并未对基质利用速率的测定产生影响。

    以上实验结果表明,经过40 d的衰减培养后,NO3-N环境下的厌氧氨氧化污泥剩余基质利用速率最大(即相应的衰减最小),NO2-N环境次之,厌氧环境最小(即相应的衰减最大)。

  • 依据测定的厌氧氨氧化污泥的R0与缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境下的Rt,采用式(6),可得出不同环境下−ln(Rt/R0)随时间的变化,结果见图5。由此可见,投加NO2-N和NO3-N的缺氧环境下,厌氧氨氧化菌的衰减系数分别为0.035 2 d−1和0.025 7 d−1,厌氧环境下,厌氧氨氧化菌的衰减系数为0.051 2 d−1

    由上述实验结果可知,厌氧及缺氧(NO2-N、NO3-N)环境下,厌氧氨氧化菌的衰减系数依次减小。这是因为在厌氧环境中,35 ℃的温度下,厌氧氨氧化菌新陈代谢仍比较旺盛,在没有外源基质的情况下,导致大量细菌进行衰减。而在缺氧环境中,厌氧氨氧化菌以NO2-N作为基质,与投加NO3-N的环境相比,NO2-N的存在会促进厌氧氨氧化菌的衰减。

    由于厌氧氨氧化菌的增殖速率较小,并且启动一个具有高效脱氮效能的厌氧氨氧化反应器所需时间较长。因此,在进行污泥保存时,维持NO3-N的缺氧环境有利于厌氧氨氧化菌活性和数量的保存。

  • 厌氧氨氧化菌的种类、纯度及所处环境不同均会影响衰减系数。表2为文献报道的不同条件下厌氧氨氧化菌的衰减系数。SCAGLIONE等[17]研究了35 ℃下厌氧氨氧化菌的衰减系数,其中含有3种不同种属的厌氧氨氧化菌(Candidatus Brocadia anammoxidansCandidatus Kuenenia stuttgartiensis以及1种尚未鉴定的浮霉菌),总的衰减系数为0.004 8 d−1,小于本研究的实验结果,这可能是由于实验所用污泥中厌氧氨氧化菌的种类及纯度不同所致。李祥等[18]采用一阶指数衰减模型对厌氧氨氧化菌在(30±2) ℃条件下的衰减系数进行了测定,结果为0.063 0 d−1,略大于本研究的实验结果,这可能是一阶指数衰减模型依据的是衰减培养过程中MLVSS的变化,MLVSS表征的是总菌,而厌氧氨氧化菌不能进行纯培养,污泥中会含有一定数量的其他细菌,从而导致测定结果出现误差。本研究依据厌氧氨氧化污泥基质利用速率随时间的变化确定衰减系数,可有效避免非纯培养体系造成的误差。

    目前,硝化菌和异养菌的衰减系数也被众多学者研究。HENZE等[23]的研究结果见表3。异养菌在10 ℃和20 ℃下的衰减系数分别为0.20 d−1和0.40 d−1,而硝化菌在10 ℃和20 ℃下的衰减系数分别为0.05 d−1和0.15 d−1。SALEM等[24]也研究了在20 ℃好氧条件下的AOB和NOB的衰减系数,分别为0.02 d−1和0.08 d−1。一般情况下,温度越高,衰减系数越大,因此,在相同温度下,异养菌、硝化菌和厌氧氨氧化菌的衰减系数依次减小。

  • 1)依据基质利用速率测定混合菌群中厌氧氨氧化菌的衰减系数,可有效避免由于其他细菌的衰减而引起的实验误差。

    2)采用基质利用速率测定方法,确定了在缺氧(NO2-N、NO3-N)及厌氧环境下厌氧氨氧化菌的衰减系数分别为0.035 2、0.025 7和0.051 2 d−1,这表明厌氧氨氧化菌的衰减系数与衰减环境密切相关。相比于其他自养菌,厌氧氨氧化菌的衰减系数较小。

    3)由于厌氧氨氧化菌的增殖速率很小,在进行污泥保存时,厌氧条件下厌氧氨氧化菌衰减较快,维持NO3-N的缺氧环境有利于厌氧氨氧化菌活性和数量的保存。

参考文献 (24)

返回顶部

目录

/

返回文章
返回